BD، 566385، BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer Plus

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: بروتوكولات إجراءات الفحص الموصى بها للتلوين المناعي الفلوري متعدد الألوان للخلايا باستخدام محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer Plus. تلوين سطحي متعدد الألوان لعينات الخلايا البشرية في أنابيب أو صفائح 96 بئرًا باستخدام كواشف تلوين فردية. 1. أضف 10 ميكرولتر من محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer Plus إلى جميع الأنابيب أو الآبار المطلوبة للتجربة. ملاحظة: لا تعتمد كمية 10 ميكرولتر من محلول التلوين Brilliant Stain Buffer Plus لكل أنبوب أو بئر على حجم التلوين النهائي أو كمية الخلايا المستخدمة لكل أنبوب أو عدد الأجسام المضادة الفلورية من BD المستخدمة في التلوين. على الرغم من أن هذه البروتوكولات مصممة للاستخدام مع الخلايا البشرية، إلا أنه يمكن تكييفها بسهولة لتحليل خلايا الفئران أو خلايا من أنواع أخرى، على سبيل المثال، عن طريق تلوين خلايا الفئران عند 4 درجات مئوية بدلاً من درجة حرارة الغرفة. 2. أضف كل كاشف فلوري بالحجم الموصى به لكل اختبار (على سبيل المثال، 5 ميكرولتر أو 20 ميكرولتر). انتقل إلى البروتوكول 1 أو 2 أو 3. ملاحظة: إذا لم يصل الحجم الإجمالي للمزيج من الخطوتين 1 و2 إلى 50 ميكرولتر أو يتجاوزها لكل اختبار، فقم بزيادة الحجم الإجمالي إلى 50 ميكرولتر بإضافة محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656). البروتوكول 1 لتلوين عينات الدم الكامل في الأنابيب: أ. أضف 100 ميكرولتر من الدم الكامل البشري إلى كل أنبوب. ب. رج محتويات الأنبوب جيدًا. ج. حضّن الخلايا المعلقة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. د. أضف 2 مل من محلول التحلل BD FACS™ (رقم المنتج 349202؛ 10 دقائق) أو محلول التحلل BD Pharm Lyse™ (رقم المنتج 555899؛ 15 دقيقة) لكل أنبوب، وحضّنه في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. و. اسحب السائل الطافي؛ أضف 2-3 مل من محلول التلوين/الغسل، على سبيل المثال، محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) أو محلول التلوين BD Pharmingen™ (BSA) (رقم المنتج 554657). ز. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. ح. اسحب السائل الطافي وأعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول التلوين/الغسل لتحليل التدفق الخلوي. البروتوكول 2 لتلوين خلايا الدم أحادية النواة الطرفية أو عينات الدم الكامل المحللة من كريات الدم الحمراء في الأنابيب: أ. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا البشرية إلى كل أنبوب. ب. رج محتويات الأنبوب. ج. حضّن الخلايا المعلقة (لمدة 30 دقيقة) في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. أضف 2 مل من محلول التلوين/الغسل لكل أنبوب. افصل الخلايا بالطرد المركزي (لمدة 5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي، ثم أضف 2-3 مل من محلول التلوين/الغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي (لمدة 5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي، ثم أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول التلوين/الغسل لتحليل التدفق الخلوي. البروتوكول 3 لتلوين خلايا الدم أحادية النواة الطرفية أو عينات الدم الكامل المحللة من كريات الدم الحمراء في صفائح 96 بئرًا. ملاحظة: على الرغم من أن هذا البروتوكول مصمم للاستخدام مع الخلايا البشرية، إلا أنه يمكن تكييفه بسهولة لتحليل خلايا الفئران أو خلايا من أنواع أخرى. أ. أضف 50 ميكرولتر من الخلايا البشرية إلى كل بئر. ب. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. اغسل بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الصبغ/الغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي. أعد تعليق الخلايا المترسبة بإضافة 250 ميكرولتر من محلول الصبغ/الغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) بسرعة 1400-1500 دورة في الدقيقة. تخلص من السائل الطافي. أعد تعليق الخلايا المترسبة جيدًا باستخدام 150 ميكرولتر من محلول الصبغ/الغسل عن طريق سحب الخلايا المعلقة عدة مرات باستخدام الماصة. انقل محتويات البئر إلى الأنابيب، وأضف المزيد من محلول الصبغ/الغسل إلى الأنابيب حسب الحاجة لتحليل التدفق الخلوي. ملاحظة: بدلاً من ذلك، يمكنك الحصول على عينات لتحليل التدفق الخلوي مباشرة من الصفيحة. تلوين متعدد الألوان داخل الخلايا لعينات الخلايا في أنابيب أو صفائح 96 بئرًا باستخدام كواشف تلوين فردية: 1. أضف 10 ميكرولتر من محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer Plus إلى جميع الأنابيب أو الآبار المطلوبة للتجربة. ملاحظة: لا تعتمد كمية 10 ميكرولتر من محلول التلوين Brilliant Stain Buffer Plus لكل أنبوب أو بئر على حجم التلوين النهائي أو كمية الخلايا المستخدمة في كل أنبوب أو عدد الأجسام المضادة الفلورية من BD المستخدمة في التلوين. 2. أضف كل كاشف فلوري بالحجم الموصى به لكل اختبار (مثل 5 ميكرولتر أو 20 ميكرولتر). ملاحظة: إذا لم يصل الحجم الإجمالي للمزيج من الخطوتين 1 و2 إلى 50 ميكرولتر أو يتجاوزها لكل اختبار، فقم بزيادة الحجم الإجمالي إلى 50 ميكرولتر بإضافة محلول التلوين BD Pharmingen Stain Buffer (FBS). بالنسبة لبروتوكولات التلوين داخل الخلايا التي تتطلب الحفاظ على نفاذية الخلايا أثناء التلوين، استخدم محلول BD Perm/Wash™ (رقم المنتج 554723). البروتوكول 4 لتلوين الأهداف داخل الخلايا في الأنابيب أو صفائح 96 بئرًا. ملاحظة: للتلوين السطحي الأولي، اتبع البروتوكولات من 1 إلى 3 أعلاه حسب الاقتضاء. إذا كان بروتوكول التلوين داخل الخلايا يتطلب استخدام محلول BD Perm/Wash أثناء خطوات التلوين والغسل، فاستخدمه في الخطوات ب، هـ، و ح، وإلا فاستخدم محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS). أ. اجعل نفاذية الخلايا وفقًا لبروتوكول النفاذية المطلوب. ب. أضف 50 ميكرولتر من محلول التلوين المناسب. ج. أضف حجم اختبار واحد من الخليط من الخطوتين 1 و2 (كواشف التلوين بالإضافة إلى محلول BD Horizon Brilliant Stain Buffer Plus). د. حضّن عند 4 درجات مئوية لمدة 30-60 دقيقة في الظلام. هـ. اغسل بمحلول الغسل المناسب (1 مل/غسلة للتلوين في الأنابيب و250 ميكرولتر/غسلة كحجم نهائي للتلوين في صفائح الميكروويل). و. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) عند 1400-1500 دورة في الدقيقة. ز. تخلص من السائل الطافي. ح. اغسل بمحلول الغسل المناسب (1 مل/غسلة للتلوين في الأنابيب و250 ميكرولتر/غسلة كحجم نهائي للتلوين في صفائح الميكروويل). ط. افصل الخلايا بالطرد المركزي (5 دقائق) عند 1400-1500 دورة في الدقيقة. ي. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen (FBS) قبل تحليل التدفق الخلوي. تلوين عينات الخلايا البشرية متعددة الألوان في أنابيب أو صفائح ذات 96 بئرًا باستخدام مزيج من كواشف التلوين: بدلًا من إضافة كواشف التلوين بشكل فردي إلى كل أنبوب أو بئر في صفيحة ذات 96 بئرًا، قد يكون من الأفضل استخدام مزيج من كواشف التلوين، أي مزيج من اثنين أو أكثر من كواشف التلوين الفلورية. يوضح البروتوكول التالي مثالًا على كيفية تحضير مزيج من الأجسام المضادة الفلورية خماسية الألوان لكل اختبار، والذي يحتوي بالفعل على محلول التلوين BD Horizon Brilliant Stain Buffer Plus. العينات البشرية: مزيج الكواشف الفلورية المُحضّرة مسبقًا. لكل اختبار متعدد الألوان باستخدام مزيج الكواشف الفلورية: 1) أضف 10 ميكرولتر من محلول BD Horizon Brilliant Stain Buffer Plus لكل اختبار. 2) أضف كل كاشف فلوري بالحجم الموصى به لكل اختبار (5 ميكرولتر أو 20 ميكرولتر). 3) أضف محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) ليصل حجم كل اختبار إلى 50 ميكرولتر على الأقل. 4) امزج الكواشف (خاصةً بعد إضافة كواشف BD Horizon Brilliant). 5) خزّن المزيج في درجة حرارة 4 درجات مئوية بعيدًا عن الضوء إذا كنت ستستخدمه لاحقًا. ملاحظة: يُفضّل استخدام مزيج الكواشف الفلورية الذي يحتوي على أكثر من كاشف واحد من البنفسجي اللامع و/أو الأزرق اللامع خلال 24 ساعة من التحضير عند تخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية، أو خلال 4 ساعات من الاستخدام. عند التخزين في درجة حرارة الغرفة. مع ذلك، عند وجود أكثر من كاشف واحد من كواشف الأشعة فوق البنفسجية اللامعة (BUV) في المزيج، يُفضل استخدامه في غضون ساعتين من التحضير بغض النظر عن درجة حرارة التخزين. لمزيد من الإرشادات، راجع الجدول 1 "مثال على تحضير مزيج أجسام مضادة فلورية بخمسة ألوان يحتوي على نوعين مختلفين من مُقترنات BD Horizon™ Brilliant Violet (BV)" في نهاية هذا القسم. التعويض والإعداد: يمكن استخدام محلول BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer Plus في ضوابط التعويض أحادية اللون باستخدام الخلايا. يتوافق المحلول مع BD® Compbeads، ولكنه لم يُختبر مع خرزات التعويض من موردين آخرين. للحصول على أدق تعويض، يجب تعريض ضوابط التعويض المُحضرة باستخدام الخلايا أو الخرزات لمحلول BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer لنفس مدة تعريض لوحة الألوان المتعددة المقابلة. بالإضافة إلى ذلك، سيتم إنشاء التعويض الأكثر دقة عند استخدام BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer في جميع عناصر التحكم في التعويض، بما في ذلك أصباغ البوليمر اللامعة وغير البوليمرية.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. Alexa Fluor® علامة تجارية مسجلة لشركة Life Technologies Corporation. يخضع مُنظف BD Horizon Brilliant Stain Buffer لواحد أو أكثر من براءات الاختراع الأمريكية التالية: 8,110,673؛ 8,158,444؛ 8,575,303؛ 8,354,239. يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS).