BD، 571607، مجموعة BD Pharmingen™ PE النشطة لتحفيز موت الخلايا المبرمج باستخدام كاسبيز-3

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: C92-605.rMAb هو جسم مضاد أحادي النسيلة مُعاد التركيب مُستخلص من خلايا هجينة C92-605. يتعرف هذا الجسم المضاد تحديدًا على الشكل النشط من كاسبيز-3 في الخلايا البشرية والفأرية. لم يُبلغ عن تعرفه على الشكل الأولي للإنزيم من كاسبيز-3. تلعب عائلة الكاسبيز من البروتيازات السيستينية أدوارًا حاسمة في موت الخلايا المبرمج والالتهاب. يُعد كاسبيز-3 بروتيازًا رئيسيًا يتم تنشيطه خلال المراحل المبكرة من موت الخلايا المبرمج، ومثل غيره من أفراد عائلة الكاسبيز، يتم تصنيعه كإنزيم أولي غير نشط تتم معالجته في الخلايا التي تخضع لموت الخلايا المبرمج عن طريق التحلل الذاتي و/أو الانقسام بواسطة بروتياز آخر. تتكون الأشكال المُعالجة من الكاسبيز من وحدات فرعية كبيرة (17-22 كيلو دالتون) وصغيرة (10-12 كيلو دالتون) تتحد لتكوين إنزيم نشط. يُعدّ الكاسبيز-3 النشط، وهو مؤشر للخلايا التي تخضع للاستماتة، ثنائيًا غير متجانس من وحدتين فرعيتين بوزن 17 و12 كيلو دالتون، مشتقًا من الإنزيم الأولي بوزن 32 كيلو دالتون. يقوم الكاسبيز-3 النشط بتحليل وتنشيط الكاسبيزات الأخرى، بالإضافة إلى أهداف ذات صلة في السيتوبلازم، مثل D4-GDI وBcl-2، وفي النواة (مثل PARP). تُعدّ مجموعة BD Pharmingen™ PE Active Caspase-3 Apoptosis Kit أداة قيّمة لدراسة دور الكاسبيز-3 النشط في الاستماتة. توفر المجموعة بروتوكولًا وكواشف لتثبيت الخلايا، ونفاذيتها، وتلوينها مناعيًا فلوريًا لتحليل مستويات الكاسبيز-3 النشط المُعبَّر عنه داخل الخلايا، والمُشارك في موت الخلايا المبرمج، باستخدام قياس التدفق الخلوي.
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل ظروف مثالية، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط والصبغة الحرة. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: تحفيز موت الخلايا المبرمج بواسطة كامبتوثيسين. المواد: 1. تحضير محلول أساسي بتركيز 1.0 ملي مولار من كامبتوثيسين (سيجما-ألدريتش، رقم المنتج C-9911) في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO). كامبتوثيسين، وهو مستخلص من شجرة كامبتوثيكا أكيوميناتا الصينية، مثبط قوي لإنزيم توبويزوميراز 1، وهو جزيء ضروري لتخليق الحمض النووي. وقد أشارت التقارير إلى أن كامبتوثيسين يحفز موت الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على الجرعة في المختبر. 2. خلايا جركات (سرطان الدم الليمفاوي التائي البشري؛ ATCC® TIB-152™). ملاحظة: يمكن معالجة الخلايا التائية للفأر أو أنواع أخرى من الخلايا أو خطوط الخلايا بنفس الطريقة عن طريق زراعة عامل يحفز موت الخلايا المبرمج مثل ديكساميثازون كما هو موضح. الإجراء: 1. إضافة كامبتوثيسين (بتركيز نهائي 4-6 ميكرومولار) إلى 1 × 10^6 خلية/مل من خلايا جركات المتكاثرة. ٢. حضّن الخلايا لمدة ٤ ساعات عند درجة حرارة ٣٧ درجة مئوية. إجراء بروتوكول تلوين الكاسبيز-٣ النشط ١. حدد الكمية الإجمالية للعينات التجريبية (الاختبارات) واحسب كمية محلول BD Perm/Wash™ (١×) والأجسام المضادة التي ستحتاجها بحيث يحتوي كل اختبار على ١٠٠ ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash™ (١×) و٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة كما يلي: عدد الاختبارات، عدد الخلايا، حجم محلول Perm/Wash™ (مل)، حجم الأجسام المضادة. (ميكرولتر) 1 1 × 10^6 0.1 20 5 5 × 10^6 0.5 100 10 10 × 10^6 1.0 200 20 20 × 10^6 2.0 400 2. خفف الكمية المطلوبة من محلول BD Perm/Wash™ (10×) بنسبة 1:10 في الماء المقطر قبل الاستخدام. ملاحظة: قد يُلاحظ وجود راسب أحيانًا مع محلول BD Perm/Wash™ (10×)، ولن يؤثر ذلك على أداء المحلول. يمكن إزالة الراسب بترشيح المحلول 1× من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر. 3. اغسل الخلايا مرتين بمحلول PBS بارد 1×، ثم أعد تعليق الخلايا في محلول BD Cytofix/Cytoperm™ بتركيز 1 × 10^6 خلية/0.5 مل. ٤. حضّن الخلايا لمدة ٢٠ دقيقة على الجليد. ٥. افصل الخلايا، ثم اسحب محلول BD Cytofix/Cytoperm™ وتخلص منه؛ واغسلها مرتين بمحلول BD Perm/Wash™ (١×) بحجم ٠.٥ مل من المحلول لكل ١ × ١٠^٦ خلية في درجة حرارة الغرفة. ٦. أعد تعليق الخلايا في محلول BD Perm/Wash™ (١×) المحسوب أعلاه بالإضافة إلى الجسم المضاد، وحضّنها لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٧. اغسل كل عينة في ١.٠ مل من محلول BD Perm/Wash™ (١×)، ثم أعد تعليقها في ٠.٥ مل من محلول BD Perm/Wash™ (١×) وحللها باستخدام قياس التدفق الخلوي. تحذير: يحتوي محلول التثبيت والنفاذية Cytofix/Cytoperm (١×) (المكون ٥١-٦٨٩٦KC) على ٤.٢٪ فورمالديهايد. تحذيرات: ضار عند استنشاقه. يُسبب تهيجًا للجلد. يُسبب تلفًا خطيرًا للعين. قد يُسبب رد فعل تحسسي للجلد. يُشتبه في تسببه بعيوب وراثية. قد يُسبب السرطان. طريقة التعرض: الاستنشاق. قد يُسبب تهيجًا في الجهاز التنفسي. احتياطات السلامة: ارتدِ ملابس واقية/واقيًا للعينين. ارتدِ قفازات واقية. لا تستنشق الرذاذ/الأبخرة/البخاخ. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيبًا.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يرجى زيارة الموقع الإلكتروني bd.com/patents.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر