BD، 572179، لوحة بروتينات الخلايا البائية BD® OMICS-One

التفاعل: بشري (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: تسلسل الحمض النووي للخلايا المفردة من الطرف 3' (مؤهل)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
محلول التخزين: مسحوق مجفف بالتجميد يحتوي على BSA و ≤ 0.25% أزيد الصوديوم.
الوصف: تتكون لوحة بروتينات الخلايا البائية BD® OMICS-One من 30 نوعًا مختلفًا من الأجسام المضادة النوعية ضد مؤشرات الخلايا البائية الرئيسية في أنبوب واحد. صُممت هذه اللوحة خصيصًا للعمل على نظام BD Rhapsody™، وقد تم اختبارها لضمان تكاملها التام مع مجموعة أدوات التحليل التالية: تحليل النسخ الكامل (WTA) من BD Rhapsody™، وتحليل mRNA المستهدف، ومجموعة BD® لتحليل الخلايا المفردة المتعددة (SMK)، وتحليل تسلسل CITE-seq داخل الخلايا (IC-AbSeq) من BD®، وتحليل BD Rhapsody™ TCR/BCR Next متعدد الأوميات للبشر. تم ربط كل جسم مضاد على حدة بسلسلة قليلة النوكليوتيدات تحتوي على تسلسل باركود خاص بالجسم المضاد، محاط بذيل متعدد الأدينين (polyA) في الطرف 3' وموقع ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الطرف 5'. تم توليد جميع تسلسلات الباركود AbSeq حاسوبيًا بأقل تشابه تسلسلي مع الجينوم البشري، وتتميز ببنية ثانوية متوقعة منخفضة، ومسافة هامينغ عالية ضمن مجموعة BD® من الأجسام المضادة والأوليغونوكليوتيدات، مما يسمح بتصحيح أخطاء التسلسل ورسم خرائط فريدة. يسمح ذيل البولي أدينين للأوليغونوكليوتيد بالتقاط تسلسل الباركود بواسطة خرزات BD Rhapsody™ المحسّنة لالتقاط الخلايا. يتيح مقبض PCR 5' توليد مكتبة تسلسل فعّالة لمنصات التسلسل المختلفة. يوجد كل جسم مضاد على حدة بتركيز مثالي ضمن مجموعة 30-plex لتمكين دقة فائقة في تحديد الهدف والخلايا. صُممت لوحة بروتينات الخلايا البائية بتقنية SMART. تساعد تقنية SMART على خفض تكلفة التسلسل مع زيادة دقة البيانات عن طريق إضعاف الأجسام المضادة التي تستهدف المؤشرات الأولية عالية التعبير، وعن طريق السماح بإعادة تخصيص قراءات التسلسل للمؤشرات المعبر عنها بمستويات أقل. بفضل تقنية SMART، يمكن تحديد كمية المؤشرات ذات التعبير المنخفض دون الحاجة إلى إجراء تسلسل أعمق وتكاليف تسلسل باهظة. المؤشران المحددان في لوحة الخلايا البائية هما CD23 وHLA-DR.
التحضير والتخزين: يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد ومُعايرًا مسبقًا. 1. أخرج أنبوب لوحة بروتين الخلايا البائية BD® OMICS-One من الكيس المعدني واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. 2. تأكد من وجود الراسب في قاع الأنبوب. إذا لم يكن كذلك، فقم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب. 3. أضف 35 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى قاع الأنبوب واترك الأجسام المضادة لتذوب لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. انقل الأجسام المضادة المذابة إلى الثلج حتى تصبح الخلايا جاهزة للتلوين. ملاحظة: أعد إذابة الأجسام المضادة مباشرة قبل تلوين الخلايا. قد يؤدي حضانة الأجسام المضادة المذابة لفترة طويلة إلى زيادة الخلفية غير النوعية. ٥. بالنسبة لتقنية BD® AbSeq Ab-Oligo drop-in التي تحتوي على ٦٠ نسخة أو أقل، حضّر مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix باتباع الإجراءات الموضحة في الجدولين التاليين في أنبوب LoBind سعة ١٫٥ مل على الثلج. ملاحظة: بالنسبة لتقنية drop-in التي تحتوي على أكثر من ٦٠ نسخة، يُرجى التواصل مع الدعم الفني لإجراء الحسابات. للتوسيم التسلسلي باستخدام علامات العينات أو بدونها، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون عينة 1 (ميكرولتر) عينة 1 + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 140 – (2.0 × N) 182 – (2.6 × N) 364 – (5.2 × N) الإجمالي 140 182 364 للتوسيم المشترك مع علامات العينات، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) عينة واحدة + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 120 – (2.0 × N) 156 – (2.6 × N) 312 – (5.2 × N) الإجمالي 120 156 312 * N = عدد الأجسام المضادة المضافة. N = 0 إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مضافة. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. 6. امزج مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم باستخدام الماصة. قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في القاع، ثم أعد الأنبوب إلى الثلج. 7. للوسم التسلسلي باستخدام علامات العينات أو بدونها، أضف لكل عينة 140 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم (المكون من قطرات) إلى الأنبوب الذي يحتوي على 35 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا البائية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. للوسم المشترك باستخدام علامات العينات، أضف لكل عينة 120 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم (المكون من قطرات) و20 ميكرولتر من علامة العينة إلى الأنبوب الذي يحتوي على 35 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا البائية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. 8. امزج الخليط باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب، ثم أعد الأنبوب إلى الثلج. 9. قم بالطرد المركزي للخلايا عند 400 × g لمدة 5 دقائق. في حال استخدام مُثبِّط مستقبلات Fc، انتقل إلى الخطوة 10. وإلا، فانتقل إلى الخطوة 11. 10. (اختياري) بالنسبة للعينات التي تحتوي على خلايا نخاعية وخلايا ليمفاوية بائية، توصي شركة BD Biosciences بحجب الإشارات الإيجابية الكاذبة غير النوعية التي تتوسطها مستقبلات Fc باستخدام مُثبِّط مستقبلات Fc البشري من BD (رقم المنتج 564220). أ. لإجراء عملية الحجب، ضع مزيج مُثبِّط مستقبلات Fc الرئيسي في أنبوب LoBind جديد سعة 1.5 مل موضوع على الثلج: _________________________________________________________________________________ المكون عينة واحدة (ميكرولتر)* عينة واحدة + زيادة 20% (ميكرولتر) مصل جنيني بقري† (رقم المنتج 554656) 20.0 24.0 مُثبِّط مستقبلات Fc‡ (رقم المنتج 564220) 5.0 6.0 الإجمالي 25.0 30.0 * يكفي لما يصل إلى مليون خلية. لحجب المزيد من الخلايا، اضبط الحجم. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. ب. امزج مزيج Fc Block MasterMix باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة. ضعه على الثلج. ج. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. د. أعد تعليق الخلايا في 25 ميكرولتر من مزيج Fc Block MasterMix. هـ. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة (من 15 إلى 25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق. و. أضف 175 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 إلى معلق الخلايا. امزج باستخدام الماصة، ثم انتقل إلى الخطوة 12. 11. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. أضف 25 ميكرولتر من محلول التلوين (FBS) إلى 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq الرئيسي المُحضر في الخطوة 8، ليصل الحجم الإجمالي إلى 200 ميكرولتر. أعد تعليق الخلايا في هذا الحجم الإجمالي. امزج المحلول جيدًا باستخدام الماصة. 12. انقل الخلايا مع محلول BD® AbSeq الرئيسي إلى أنبوب فالكون جديد من البوليسترين سعة 5 مل. 13. لوّن الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة. 14. أضف 3-4 مل من محلول التلوين (FBS) إلى الخلايا المُلَوَّنة وامزجها جيدًا باستخدام الماصة. 15. افصل الأنبوب بالطرد المركزي عند 400 × g لمدة 5 دقائق. 16. انزع غطاء الأنبوب واقلبه لتفريغ السائل الطافي في حاوية النفايات الخطرة بيولوجيًا. أبقِ الأنبوب مقلوبًا وجففه برفق بقطعة قماش خالية من الوبر لإزالة أي سائل متبقٍ من حافة الأنبوب. ١٧. كرر الخطوات من ١٤ إلى ١٦ مرتين إضافيتين ليصبح المجموع ٣ غسلات. ١٨. أعد تعليق راسب الخلايا المغسولة في ٦٢٠ ميكرولتر من محلول العينة البارد من كاشف خرطوشة BD Rhapsody™ المحسّن V3 (رقم الكتالوج ٦٦٧٠٥٢)، ثم تابع عملية التقاط الخلايا المفردة باتباع خطوات الغسل على الخرطوشة الموضحة أدناه. راجع بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT (معرف المستند ٢٣-٢٤٢٥٢) أو بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام BD Rhapsody™ HT Xpress (معرف المستند ٢٣-٢٤٢٥٣) لمزيد من التفاصيل. ملاحظة: قم بغسل الخرطوشة بعد استقرار الخلايا (حضانة لمدة 8 دقائق) كما يلي: أ) في قسم البروتوكول الخاص بـ "تحميل الخلايا في خرطوشة BD Rhapsody™ ذات 8 مسارات"، بعد تحميل الخلايا، حضّن الخرطوشة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 8 دقائق. ب) ضع الخرطوشة على جهاز BD Rhapsody™ HT Xpress وقم بالخطوات التالية: _____________________________________________________________ المادة المراد تحميلها الحجم (ميكرولتر) مسار واحد وضع الماصة هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل ج) (اختياري) قم بخطوة الماسح الضوئي: تحميل الخلايا مسح ضوئي، إذا كنت تستخدم نظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (معرف المستند 23-24252). لا حاجة للتأخير لمدة 8 دقائق قبل المسح الضوئي. تحذير: تُعتبر جميع العينات والمواد البيولوجية مواد خطرة بيولوجيًا. تعامل معها كما لو كانت قادرة على نقل العدوى، وتخلص منها باتباع الاحتياطات اللازمة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تستخدم الفم أبدًا في عملية السحب. ارتدِ ملابس واقية مناسبة، ونظارات واقية، وقفازات. قائمة بجميع أنواع AbSeq البشرية الثلاثين المضمنة في لوحة BD® OMICS-One للخلايا البائية: _____________________________________________________________________________ النوع المستنسخ معرف النيوكليوتيد رمز BD® AbSeq التسلسل الشريطي CD20 2H7 AHS0008 TTGCTTGTTGCGCGTTAGAGAGTATGTCGGGAGATG CD275 2D3/B7-H2 AHS0011 GTTTATATGTACGACGCCCGGTTGACGAGTGGAAGT CD38 HIT2 AHS0022 GTCAACGATGGGTAGCGGTAGAAATAACGGAACTGG CD95 DX2 AHS0023 GGCCCGTTAGAGTTGGTATCCGTATGAAGGTTAGCT CD27 M-T271 AHS0025 TGTCCGGTTTAGCGAATTGGGTTGAGTCACGTAGGT CD19 SJ25C1 AHS0030 TAGTAATGTGTTCGTAGCCGGTAATAATCTTCGTGG HLA-DR G46-6 AHS0035 TGTTGTTATTCGTTAGTGCATCCGTTTGGGCGTGG CD185 (CXCR5) RF8B2 AHS0039 AGGAAGGTCGATTGTATAACGCGGCATTGTAACGGC CD24 ML5 AHS0042 ACTTTGGGTTGAGCGCATGATTATTCGTGACACTTT CD80 L307.4 AHS0046 GAGGGTAACGGGTGTCCAAATATCGGCTGTGTAAGT CD5 UCHT2 AHS0047 ACGAAGCGAGCGAAGAACCTATGCGATTGAGTAAGT CD10 HI10a AHS0051 ككتجتتجاتجكجتاكجاجاتتاجكجاتتاتج IgD IA6-2 AHS0058 TGAGGGATGTATAGCGAGAATTGCGACCGTAGACTT IgG G18-145 AHS0059 AGGTAGGTTATCGTAGGGTAGACTTAGCGGGCATTG CD184 (CXCR4) 12G5 AHS0060 CAGTGTTTAGAGCGGGTTGCATATGTCGTTTAGAGG CD34 581 AHS0061 TGGGTGTATTACGGTTAGTTTATGCGCGAAGGTGTT CD21 B-ly4 AHS0074 GTATTCGCGTATTGTCAGTCGGTAGGGTTATGGTCT CD9 M-L13 AHS0082 GGGTTGTAAGTCGTCGGAAGTGTGAAGCGTATAGTG CD126 M5 AHS0096 AATGGTGAATCGCCCTAGCAAGTGGTATCGGAATCG CD30 BERH8 AHS0114 CCAGTGTAGATTGAGCCGTCGATTTAGTTAGCAGTG CD40 5C3 AHS0117 GGTGTAATTGGGCTAGAACGTATATGCGGTAAGGCG CD138 MI15 AHS0121 TAAGCTGCCGGTATTGGAAACGTATCGATCTATTGG CD79B CB3-1 AHS0153 CATCATGAGTAGTTGCTTCGGCGAGTAGGTTTAATT CD22 HIB22 AHS0195 TGGTTCGTGACTGTATAGGCTTAGCTTAGGCAATTT IgM G20-127 AHS0198 TTTGGAGGGTAGCTAGTTGCAGTTCGTGGTCGTTTC CD43 1G10 AHS0200 ATGGCGGATGGATTTGTCGGTGATATTGCTCTCGTT CD268 (BAFF-R) 11C1 AHS0206 TGTGAATGAGTTAAGCGTCGCGGATATGTAGAGCCT CD23 EBVCS-5 AHS0210 TTTGATGTGGGCGGGTTGTATTACGGTTTCGAGTCT CD73 AD2 AHS0216 AAAGTAGGGTCGATCAAGGGAGTTAACGGTAGCGCT CD1d CD1d42 AHS0219 GTTAGGATTATTGACGTACCGAGTTAGGAGTGATTG
إشعارات المنتج: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. يُرجى الرجوع إلى https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics للاطلاع على البروتوكولات الفنية. خضعت عملية الإنتاج لاختبارات صارمة وتدقيق دقيق لضمان إنتاج مُقترن عالي الجودة بأداء ثابت ونشاط ارتباط نوعي. مع ذلك، لم تُجرَ اختبارات التحقق على جميع دفعات المُقترن. انتقل إلى https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/ للوصول إلى ملفات مرجع AbSeq بصيغة FASTA لتحليلات المعلوماتية الحيوية. تحذير: يُنتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. اتبع الإرشادات المحلية والولائية عند التخلص من النفايات الخطرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. للاطلاع على بيانات السلامة (SDS)، يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com.