BD، 572241، لوحة البروتينات التكيفية BD® OMICS-One

التفاعل: بشري (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: تسلسل الحمض النووي للخلايا المفردة من الطرف 3' (مؤهل)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
محلول التخزين: مسحوق مجفف بالتجميد يحتوي على BSA و ≤ 0.25% أزيد الصوديوم.
الوصف: تتكون لوحة البروتينات التكيفية BD® OMICS-One من 4 أنابيب فردية، أنبوبان من لوحة بروتينات الخلايا التائية (اختبار واحد لكل أنبوب) تحتوي على 30 نوعًا مختلفًا من البروتينات المتخصصة ضد مؤشرات الخلايا التائية الرئيسية، وأنبوبان من لوحة بروتينات الخلايا البائية (اختبار واحد لكل أنبوب) تحتوي على 30 نوعًا مختلفًا من البروتينات المتخصصة ضد مؤشرات الخلايا البائية الرئيسية. صُممت لوحة البروتينات التكيفية ووُضعت خصيصًا للعمل على نظام BD Rhapsody™، وقد تم اختبارها لتعمل بسلاسة جنبًا إلى جنب مع اختبار BD Rhapsody™ لتحليل النسخ الكامل (WTA)، واختبار mRNA المستهدف، ومجموعة BD® لتحليل الخلايا المفردة المتعددة (SMK)، واختبار BD® لتسلسل CITE-seq داخل الخلايا (IC-AbSeq)، واختبار BD Rhapsody™ TCR/BCR Next متعدد الأوميات للبشر. تم ربط كل جسم مضاد على حدة بجزيء أوليغونوكليوتيد يحتوي على تسلسل باركود خاص بالجسم المضاد، محاطًا بذيل بولي أدينين في الطرف 3' وموقع ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الطرف 5'. تم توليد جميع تسلسلات باركود AbSeq حاسوبيًا بأقل تشابه تسلسلي مع الجينوم البشري، وتتميز ببنية ثانوية متوقعة منخفضة، ومسافة هامينغ عالية ضمن مجموعة BD من الأجسام المضادة والأوليغونوكليوتيدات، مما يسمح بتصحيح أخطاء التسلسل ورسم خرائط فريدة. يسمح ذيل البولي أدينين في الأوليغونوكليوتيد بالتقاط تسلسل الباركود بواسطة خرزات BD Rhapsody™ المحسّنة لالتقاط الخلايا. يتيح موقع ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل في الطرف 5' توليد مكتبة تسلسل فعالة لمنصات التسلسل المختلفة. يوجد كل جسم مضاد على حدة بتركيز مثالي ضمن لوحة 59-plex لتمكين دقة فائقة في تحديد الهدف والمجموعات الخلوية. تم تصميم لوحة البروتين التكيفية بتقنية SMART. تُساهم تقنية SMART في خفض تكلفة التسلسل الجيني مع زيادة دقة البيانات، وذلك عن طريق إضعاف الأجسام المضادة التي تستهدف المؤشرات الأولية عالية التعبير، مما يسمح بإعادة توجيه قراءات التسلسل إلى المؤشرات ذات التعبير المنخفض. وبفضل تقنية SMART، يُمكن قياس المؤشرات منخفضة التعبير دون الحاجة إلى إجراء تسلسل أعمق وتكاليف باهظة. تتضمن لوحة البروتينات التكيفية أربعة مؤشرات نوعية مُضعفة: CD4، وCD44، وCD43، وHLA-DR.
التحضير والتخزين: يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات التحليل الموصى بها: 1. أخرج أنبوبًا واحدًا من لوحة بروتينات الخلايا التائية BD® OMICS-One وأنبوبًا واحدًا من لوحة بروتينات الخلايا البائية BD® OMICS-One من أكياسهما المعدنية، واتركهما في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. 2. تأكد من وجود الراسبين في قاع الأنبوبين. إذا لم يكونا كذلك، فقم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب. 3. لكل أنبوب، أضف 35 ميكرولترًا من الماء الخالي من النيوكلياز إلى قاع الأنبوب، واترك الأجسام المضادة لتتفاعل لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. انقل الأجسام المضادة المتفاعلة إلى الثلج حتى تصبح الخلايا جاهزة للتلوين. ملاحظة: فعّل الأجسام المضادة مباشرةً قبل تلوين الخلايا. قد يؤدي حضانة الأجسام المضادة المتفاعلة لفترة طويلة إلى زيادة الخلفية غير النوعية. ٥. بالنسبة لتقنية BD® AbSeq Ab-Oligo drop-in التي تحتوي على ٤٢ تسلسلًا أو أقل، حضّر مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix باتباع الإجراءات الموضحة في الجدولين التاليين في أنبوب LoBind سعة ١٫٥ مل على الثلج. ملاحظة: بالنسبة لتقنية drop-in التي تحتوي على أكثر من ٤٢ تسلسلًا، يُرجى التواصل مع الدعم الفني لإجراء الحسابات. للتوسيم التسلسلي باستخدام علامات العينات أو بدونها، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) 1 عينة + 2 عينة + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 105 – (2.0 × N) 137 – (2.6 × N) 273 – (5.2 × N) الإجمالي 105 137 273 للتوسيم المشترك مع علامات العينات، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) عينة واحدة + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 85 – (2.0 × N) 111 – (2.6 × N) 221 – (5.2 × N) الإجمالي 85 111 221 * N = عدد الأجسام المضادة المضافة. N = 0 إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مضافة. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. 6. امزج مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم باستخدام الماصة. قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في الأسفل، ثم أعد وضعها على الثلج. ٧. للوسم التسلسلي باستخدام علامات العينات أو بدونها، اجمع لكل عينة أنبوبين يحتويان على ٣٥ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا التائية المُعاد تكوينه و٣٥ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا البائية المُعاد تكوينه. ثم أضف ١٠٥ ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم إلى الأنبوب الذي يحتوي على ٧٠ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا التائية والبائية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى ١٧٥ ميكرولتر. للوسم المشترك باستخدام علامات العينات، اجمع لكل عينة أولاً أنبوبين يحتويان على ٣٥ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا التائية المُعاد تكوينه و٣٥ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا البائية المُعاد تكوينه. ثم أضف 85 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq labeling MasterMix المُضاف و20 ميكرولتر من Sample Tag إلى الأنبوب الذي يحتوي على 70 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا التائية والبائية المُعاد تكوينها، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. 8. امزج الخليط باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب، وأعده إلى الثلج. 9. اطرد الخلايا مركزياً عند 400 × g لمدة 5 دقائق. إذا تم استخدام Fc Block، فانتقل إلى الخطوة 10. إذا لم يتم استخدام Fc Block، فانتقل إلى الخطوة 11. 10. (اختياري) بالنسبة للعينات التي تحتوي على خلايا نخاعية وخلايا ليمفاوية بائية، توصي BD Biosciences بحجب الإشارات الإيجابية الكاذبة غير النوعية التي تتوسطها مستقبلات Fc باستخدام Human BD Fc Block (رقم المنتج 564220). لإجراء عملية الحجب، اسحب مزيج Fc Block MasterMix باستخدام ماصة وضعها في أنبوب LoBind جديد سعة 1.5 مل موضوع على الثلج: _________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر)* 1 عينة + 20% زيادة (ميكرولتر) FBS† (رقم الكتالوج 554656) 20.0 24.0 Fc Block‡ (رقم الكتالوج 564220) 5.0 6.0 الإجمالي 25.0 30.0 * يكفي لما يصل إلى مليون خلية. لحجب المزيد من الخلايا، اضبط الحجم. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. ب. امزج مزيج Fc Block MasterMix باستخدام ماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة. ضعه على الثلج. ج. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. د. أعد تعليق الخلايا في 25 ميكرولتر من محلول Fc Block MasterMix. هـ. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة (من 15 إلى 25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق. و. أضف 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 إلى معلق الخلايا. امزج المحلول جيدًا بالماصة، ثم انتقل إلى الخطوة 12. 11. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. أضف 25 ميكرولتر من محلول التلوين (FBS) إلى 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 ليصل الحجم الكلي إلى 200 ميكرولتر. أعد تعليق راسب الخلايا في هذا الحجم الكلي. امزج المحلول جيدًا بالماصة. 12. انقل الخلايا مع محلول BD® AbSeq labeling MasterMix إلى أنبوب فالكون جديد من البوليسترين سعة 5 مل. ١٣. صبغ الخلايا على الجليد لمدة ٣٠ دقيقة. ١٤. أضف ٣-٤ مل من محلول الصبغ (FBS) إلى الخلايا المُلَوَّنة واخلطها جيدًا باستخدام الماصة. ١٥. افصل الخلايا بالطرد المركزي عند ٤٠٠ × g لمدة ٥ دقائق. ١٦. انزع غطاء الأنبوب واقلبه لسكب السائل الطافي في النفايات الخطرة بيولوجيًا. أبقِ الأنبوب مقلوبًا وجففه برفق بقطعة قماش خالية من الوبر لإزالة أي سائل طافي متبقٍ من حافة الأنبوب. ١٧. كرر الخطوات من ١٤ إلى ١٦ مرتين إضافيتين ليصبح المجموع ثلاث غسلات. ١٨. أعد تعليق راسب الخلايا المغسولة في ٦٢٠ ميكرولتر من محلول العينة البارد من كاشف خرطوشة BD Rhapsody™ المُحسَّن V3 (رقم المنتج ٦٦٧٠٥٢) وانتقل إلى عملية التقاط الخلايا المفردة باتباع خطوات الغسل على الخرطوشة الموضحة في الخطوات الفرعية التالية. للحصول على تفاصيل إضافية، يُرجى الرجوع إلى بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT (رقم المستند 23-24252) أو بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام BD Rhapsody™ HT Xpress (رقم المستند 23-24253). ملاحظة: بعد استقرار الخلايا (حضانة لمدة 8 دقائق)، قم بغسل الخرطوشة على الخرطوشة كما يلي: أ. في قسم البروتوكول الخاص بـ "تحميل الخلايا في خرطوشة BD Rhapsody™ ذات 8 مسارات"، بعد تحميل الخلايا، حضّن الخرطوشة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 8 دقائق. ب. ضع الخرطوشة على جهاز BD Rhapsody™ HT Xpress وقم بتنفيذ العمليات التالية: ______________________________________________________________ المادة المراد تحميلها الحجم (ميكرولتر) مسار واحد وضع الماصة هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل ج. (اختياري) قم بخطوة الماسح الضوئي: تحميل الخلية مسح ضوئي، في حالة استخدام نظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (معرف المستند 23-24252). لا حاجة للتأخير لمدة 8 دقائق قبل المسح الضوئي. تحذير: تُعتبر جميع العينات والمواد البيولوجية خطرة بيولوجيًا. تعامل معها كما لو كانت قادرة على نقل العدوى وتخلص منها باستخدام الاحتياطات المناسبة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تقم أبدًا بالسحب بالماصة عن طريق الفم. ارتدِ ملابس واقية مناسبة ونظارات واقية وقفازات. قائمة بجميع أنواع الأجسام المضادة البشرية الثلاثين المضمنة في لوحة BD® OMICS-One T-Cell: ________________________________________________________________________________ النوع المستنسخ معرف الأوليغونوكليوتيد رمز شريط BD® AbSeq التسلسل CD103 Ber-ACT8 AHS0001 AAATAGTATCGAGCGTAGTTAAGTTGCGTAGCCGTT CD137 4B4-1 AHS0003 TGACAAGCAACGAGCGATACGAAAGGCGAAATTAGT CD45RA HI100 AHS0009 AAGCGATTGCGAAGGGTTAGTCAGTACGTTATGTTG CD69 FN50 AHS0010 CAATAACGGGTCATAGTAAGTCGCGAGTAAGAGGGC CD278 DX29 AHS0012 ATAGTCCGCCGTAATCGTTGTGTCGCTGAAAGGGTT CD134 (OX40) ACT35 AHS0013 جتجتجتجتجتاجاكجاكجاجتاجاتاتتكجاجت CD279 (PD-1) EH12.1 AHS0014 أتجتاجتاتكاكجاكجتاجتاجتجتاتجكاتج CD366 (TIM-3) 7D3 AHS0016 تاججتاجتككككتاتاتككجاتكجتجتجتجتتت CD223 (Lag3) T47-530 AHS0018 CGGCATGAATTAGGCGAGACTTAGTATACGAGCTGG CD95 (Fas) DX2 AHS0023 GGCCCGTTAGAGTTGGTATCCGTATGAAGGTTAGCT CD25 2A3 AHS0026 AGTTGTATGGGTTAGCCGAGAGTAGTGCGTATGATT CD127 هيل-7R-M21 AHS0028 AGTTATTAGGCTCGTAGGTATGTTTAGGTTATCGCG CD183 1C6/CXCR3 AHS0031 AAAGTGTTGGCGTTATGTGTTCGTTAGCGGTGTGGG CD4 SK3 AHS0032 TCGGTGTTATGAGTAGGTCGTCGTGCGGTTTGATGT CD196 (CCR6) 11A9 AHS0034 ACGTGTTATGGTGTTGTTCGAATTGTGGTAGTCAGT CD45RO UCHL1 AHS0036 TGAGAGGTTATTGGGCGTATGACTTCGGTGATTGTG CD194 (CCR4) 1G1 AHS0038 AATATTAGTGGGTCCTCGCGTTGGCCGGTTGTTAGT CD62L DREG-56 AHS0049 ATGGTAAATATGGGCGAATGCGGGTTGTGCTAAAGT CD272 J168-540 AHS0052 GTAGGTTGATAGTCGGCGATAGTGCGGTTGAAAGCT CD154 TRAP1 AHS0077 TAAGAGGTAAGTGCATTCGGGTATAGGCGTGATTTG CD357 (GITR) V27-580 AHS0104 TCTGTGTGTCGGGTTGAATCGTAGTGAGTTAGCGTG CD28 L293 AHS0138 TTGTTGAGGATACGATGAAGCGGTTTAAGGGTGTGG TCRgd 11F2 AHS0142 CTCGTGGGTTAGGCTTGATCGTAGTTATGTATGGTT CD44 L178 AHS0167 GTGATTGATTAGGACAGTTCGTTGCTTAGTAGTGGG TCR Va24-Ja18 6B11 AHS0175 TTCTGGTTCGGTTGAGCTACTAATTTCGTTGGATGG CD161 (KLRB1) HP-3G10 AHS0205 TTTAGGACGATTAGTTGTGCGGCATAGGAGGTGTTC CD8 SK1 AHS0228 AGGACATAGAGTAGGACGAGGTAGGCTTAAATTGCT CD3 UCHT1 AHS0231 AGCTAGGTGTTATCGGCAAGTTGTACGGTGAAGTCG CD197 (CCR7) 2-L1-A AHS0273 AATGTGTGATCGGCAAAGGGTTCTCGGGTTAATATG TIGIT tgMab-2 AHS0411 AGAGGGTTTAGTCAAGGTCGTGCGTATAGTTCAGGT قائمة بجميع الخصائص النوعية الثلاثين لتسلسل الأجسام المضادة البشرية المضمنة في لوحة BD® OMICS-One للخلايا البائية: ________________________________________________________________________________ النوعية المستنسخ معرف الأوليغونوكليوتيد تسلسل الباركود BD® AbSeq CD20 2H7 AHS0008 TTGCTTGTTGCGCGTTAGAGAGTATGTCGGGAGATG CD275 2D3/B7-H2 AHS0011 GTTTATATGTACGACGCCCGGTTGACGAGTGGAAGT CD38 HIT2 AHS0022 GTCAACGATGGGTAGCGGTAGAAATAACGGAACTGG CD95 DX2 AHS0023 GGCCCGTTAGAGTTGGTATCCGTATGAAGGTTAGCT CD27 M-T271 AHS0025 TGTCCGGTTTAGCGAATTGGGTTGAGTCACGTAGGT CD19 SJ25C1 AHS0030 تاجتاتجتجتتكجتاجككجتجتااتاتكتكجتج HLA-DR G46-6 AHS0035 تجتتجتاتتكجتتاجتجكاتكجتتتججكجتج CD185 (CXCR5) RF8B2 AHS0039 AGGAAGGTCGATTGTATAACGCGGCATTGTAACGGC CD24 ML5 AHS0042 ACTTTGGGTTGAGCGCATGATTATTCGTGACACTTT CD80 L307.4 AHS0046 GAGGGTAACGGGTGTCCAAATATCGGCTGTGTAAGT CD5 UCHT2 AHS0047 ACGAAGCGAGCGAAGAACCTATGCGATTGAGTAAGT CD10 HI10a AHS0051 ككتجتتجاتجكجتاكجاجاتتاجكجاتتاتج إيجد IA6-2 AHS0058 TGAGGGATGTATAGCGAGAATTGCGACCGTAGACTT IgG G18-145 AHS0059 AGGTAGGTTATCGTAGGGTAGACTTAGCGGGCATTG CD184 (CXCR4) 12G5 AHS0060 CAGTGTTTAGAGCGGGTTGCATATGTCGTTTAGAGG CD34 581 AHS0061 TGGGTGTATTACGGTTAGTTTATGCGCGAAGGTGTT CD21 B-ly4 AHS0074 GTATTCGCGTATTGTCAGTCGGTAGGGTTATGGTCT CD9 M-L13 AHS0082 GGGTTGTAAGTCGTCGGAAGTGTGAAGCGTATAGTG CD126 M5 AHS0096 AATGGTGAATCGCCCTAGCAAGTGGTATCGGAATCG CD30 BERH8 AHS0114 CCAGTGTAGATTGAGCCGTCGATTTAGTTAGCAGTG CD40 5C3 AHS0117 GGTGTAATTGGGCTAGAACGTATATGCGGTAAGGCG CD138 MI15 AHS0121 TAAGCTGCCGGTATTGGAAACGTATCGATCTATTGG CD79B CB3-1 AHS0153 CATCATGAGTAGTTGCTTCGGCGAGTAGGTTTAATT CD22 HIB22 AHS0195 TGGTTCGTGACTGTATAGGCTTAGCTTAGGCAATTT IgM G20-127 AHS0198 TTTGGAGGGTAGCTAGTTGCAGTTCGTGGTCGTTTC CD43 1G10 AHS0200 ATGGCGGATGGATTTGTCGGTGATATTGCTCTCGTT CD268 (BAFF-R) 11C1 AHS0206 TGTGAATGAGTTAAGCGTCGCGGATATGTAGAGCCT CD23 EBVCS-5 AHS0210 TTTGATGTGGGCGGGTTGTATTACGGTTTCGAGTCT CD73 AD2 AHS0216 AAAGTAGGGTCGATCAAGGGAGTTAACGGTAGCGCT CD1d CD1d42 AHS0219 GTTAGGATTATTGACGTACCGAGTTAGGAGTGATTG تحتوي كل من لوحات بروتين الخلايا التائية والخلايا البائية على نفس الجسم المضاد CD95.
ملاحظات المنتج: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. للاطلاع على بروتوكولات BD Rhapsody™ الإضافية، يُرجى زيارة الرابط التالي: https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة الرابط التالي: https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics. للوصول إلى ملفات AbSeq المرجعية بصيغة FASTA لتحليلات المعلوماتية الحيوية، يُرجى زيارة الرابط التالي: https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/. تحذير: يُنتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يجب اتباع الإرشادات المحلية والولائية عند التخلص من النفايات الخطرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. للاطلاع على بيانات السلامة (SDS)، يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com.