BD، 572434، لوحة بروتينات الخلايا القاتلة الطبيعية BD® OMICS-One

التفاعل: بشري (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: تسلسل الحمض النووي للخلايا المفردة من الطرف 3' (مؤهل)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: تتكون لوحة بروتينات الخلايا القاتلة الطبيعية BD® OMICS-One من 30 نوعًا مختلفًا من الأجسام المضادة المتخصصة ضد مؤشرات الخلايا القاتلة الطبيعية الرئيسية، وذلك في أنبوب واحد. صُممت هذه اللوحة خصيصًا للعمل على نظام BD Rhapsody™، وقد تم اختبارها لضمان تكاملها التام مع مجموعة أدوات التحليل التالية: تحليل النسخ الكامل (WTA) من BD Rhapsody™، وتحليل الحمض النووي الريبوزي المرسال المستهدف، ومجموعة BD® لتحليل الخلايا المفردة المتعددة (SMK)، وتحليل تسلسل الحمض النووي الريبوزي المرسال داخل الخلايا (IC-AbSeq) من BD®، وتحليل BD Rhapsody™ متعدد الأوميات لمستقبلات الخلايا التائية/الخلايا البائية البشرية. تم ربط كل جسم مضاد على حدة بسلسلة من النيوكليوتيدات تحتوي على تسلسل باركود خاص بالجسم المضاد، محاط بذيل متعدد الأدينين (polyA) في الطرف 3' وموقع ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الطرف 5'. تم توليد جميع تسلسلات الباركود AbSeq حاسوبيًا بأقل تشابه تسلسلي مع الجينوم البشري، وتتميز ببنية ثانوية متوقعة منخفضة، ومسافة هامينغ عالية ضمن مجموعة الأجسام المضادة والأوليغونوكليوتيدات من BD، مما يسمح بتصحيح أخطاء التسلسل ورسم خرائط فريدة. يسمح ذيل البولي أدينين للأوليغونوكليوتيد بالتقاط تسلسل الباركود بواسطة خرزات BD Rhapsody™ المحسّنة لالتقاط الخلايا. يتيح مقبض PCR 5' توليد مكتبات بكفاءة لمنصات التسلسل المختلفة. يوجد كل جسم مضاد على حدة بتركيز مثالي ضمن مجموعة 30-plex لتمكين دقة فائقة في تحديد الهدف والخلايا. صُممت لوحة بروتينات الخلايا القاتلة الطبيعية بتقنية SMART. تساعد تقنية SMART على خفض تكلفة التسلسل مع زيادة دقة البيانات عن طريق إضعاف الأجسام المضادة التي تستهدف المؤشرات الأولية عالية التعبير، والسماح بإعادة توجيه قراءات التسلسل إلى المؤشرات ذات التعبير المنخفض. بفضل تقنية SMART، يمكن تحديد كمية المؤشرات منخفضة التعبير دون الحاجة إلى إجراء تسلسل أعمق وتكبد تكلفة تسلسل عالية. الخاصيتان اللتان تم إضعافهما في لوحة بروتين الخلايا القاتلة الطبيعية هما CD2 و CD31.
التحضير والتخزين: يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. 1. أخرج أنبوب لوحة بروتين خلايا NK من BD® OMICS-One من الكيس المعدني واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. 2. تأكد من وجود الراسب في قاع الأنبوب. إذا لم يكن كذلك، فقم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب. 3. أضف 35 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى قاع الأنبوب واترك الأجسام المضادة لتذوب لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. ضع الأجسام المضادة المذابة على الثلج حتى تصبح الخلايا جاهزة للتلوين. ملاحظة: أعد إذابة الجسم المضاد مباشرة قبل تلوين الخلايا. قد يؤدي حضانة الجسم المضاد المذاب لفترة طويلة إلى زيادة الخلفية غير النوعية. ٥. بالنسبة لتقنية BD® AbSeq Ab-Oligo drop-in التي تحتوي على ٦٠ نسخة أو أقل، حضّر مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix في أنبوب LoBind سعة ١٫٥ مل على الثلج. ملاحظة: بالنسبة لتقنية drop-in التي تحتوي على أكثر من ٦٠ نسخة، تواصل مع الدعم الفني لإجراء الحسابات. للتوسيم التسلسلي باستخدام علامات العينات أو بدونها، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) 1 عينة + 2 عينة + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 70 – (2.0 × N) 91 – (2.6 × N) 182 – (5.2 × N) الإجمالي 70 91 182 للتوسيم المشترك مع علامات العينات، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) عينة واحدة + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 120 – (2.0 × N) 156 – (2.6 × N) 312 – (5.2 × N) الإجمالي 120 156 312 * N = عدد الأجسام المضادة المضافة. N = 0 إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مضافة. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. 6. امزج مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم باستخدام الماصة. قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في القاع، ثم أعد الأنبوب إلى الثلج. 7. في حالة الوسم التسلسلي باستخدام علامات العينة أو بدونها، أضف لكل عينة 140 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم (المكون من قطرات) إلى الأنبوب الذي يحتوي على 35 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا القاتلة الطبيعية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. في حالة الوسم المشترك باستخدام علامات العينة، أضف لكل عينة 120 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم (المكون من قطرات) و20 ميكرولتر من علامة العينة إلى الأنبوب الذي يحتوي على 35 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا القاتلة الطبيعية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. 8. امزج الخليط باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب، ثم أعد الأنبوب إلى الثلج. 9. قم بالطرد المركزي للخلايا عند 400 × g لمدة 5 دقائق. في حال استخدام مُثبِّط مستقبلات Fc، انتقل إلى الخطوة 10. في حال عدم استخدامه، انتقل إلى الخطوة 11. 10. (اختياري) بالنسبة للعينات التي تحتوي على خلايا نخاعية وخلايا ليمفاوية بائية، نوصي بحجب الإشارات الإيجابية الكاذبة غير النوعية التي تتوسطها مستقبلات Fc باستخدام مُثبِّط مستقبلات Fc البشري من BD (رقم المنتج 564220). أ. لإجراء عملية الحجب، اسحب مزيج مُثبِّط مستقبلات Fc الرئيسي باستخدام ماصة وضعها في أنبوب LoBind جديد سعة 1.5 مل موضوع على الثلج: _________________________________________________________________________________ المكون عينة واحدة (ميكرولتر)* عينة واحدة + زيادة 20% (ميكرولتر) مصل جنيني بقري† (رقم المنتج 554656) 20.0 24.0 مُثبِّط مستقبلات Fc‡ (رقم المنتج 564220) 5.0 6.0 الإجمالي 25.0 30.0 * يكفي لما يصل إلى مليون خلية. لحجب عدد أكبر من الخلايا، اضبط الحجم. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. ب. امزج مزيج Fc Block MasterMix باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة. ضعه على الثلج. ج. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. د. أعد تعليق الخلايا في 25 ميكرولتر من مزيج Fc Block MasterMix. هـ. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة (من 15 إلى 25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق. و. أضف 175 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 إلى معلق الخلايا. امزج باستخدام الماصة، ثم انتقل إلى الخطوة 12. 11. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. أضف 25 ميكرولتر من محلول التلوين (FBS) إلى 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq الرئيسي المُحضر في الخطوة 8، ليصل الحجم الإجمالي إلى 200 ميكرولتر. أعد تعليق الخلايا في هذا الحجم الإجمالي. امزج المحلول جيدًا باستخدام الماصة. 12. انقل الخلايا مع محلول BD® AbSeq الرئيسي إلى أنبوب فالكون جديد من البوليسترين سعة 5 مل. 13. لوّن الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة. 14. أضف 3-4 مل من محلول التلوين (FBS) إلى الخلايا المُلَوَّنة وامزجها جيدًا باستخدام الماصة. 15. افصل الأنبوب بالطرد المركزي عند 400 × g لمدة 5 دقائق. 16. انزع غطاء الأنبوب واقلبه لتفريغ السائل الطافي في حاوية النفايات الخطرة بيولوجيًا. أبقِ الأنبوب مقلوبًا وجففه برفق بقطعة قماش خالية من الوبر لإزالة أي سائل طافي متبقٍ من حافة الأنبوب. ١٧. كرر الخطوات من ١٤ إلى ١٦ مرتين إضافيتين ليصبح المجموع ثلاث غسلات. ١٨. أعد تعليق راسب الخلايا المغسولة في ٦٢٠ ميكرولتر من محلول العينة البارد من كاشف خرطوشة BD Rhapsody™ المحسن V3 (رقم الكتالوج ٦٦٧٠٥٢)، ثم تابع عملية التقاط الخلايا المفردة مع الغسل على الخرطوشة الموضح في الخطوات الفرعية من أ إلى ج. راجع بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي لنظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT (معرف المستند ٢٣-٢٤٢٥٢) أو بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي لنظام BD Rhapsody™ HT Xpress (معرف المستند ٢٣-٢٤٢٥٣) لمزيد من التفاصيل. ملاحظة: قم بإجراء الغسل على الخرطوشة بعد استقرار الخلايا (حضانة لمدة ٨ دقائق) كما يلي: أ. في قسم البروتوكول الخاص بـ "تحميل الخلايا في خرطوشة BD Rhapsody™ ذات 8 مسارات"، بعد تحميل الخلايا، حضّن الخرطوشة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 8 دقائق. ب. ضع الخرطوشة على جهاز BD Rhapsody™ HT Xpress ونفّذ خطوات غسل الخرطوشة الموضحة أدناه: _____________________________________________________________ المادة المراد تحميلها الحجم (ميكرولتر) مسار واحد وضع الماصة هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل ج. (اختياري) نفّذ خطوة الماسح الضوئي: تحميل الخلايا مسح ضوئي، في حال استخدام نظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (معرف المستند 23-24252). لا حاجة للتأخير لمدة 8 دقائق قبل المسح الضوئي. تحذير: تُعتبر جميع العينات والمواد البيولوجية خطرة بيولوجيًا. تعامل مع العينة بحذر كما لو كانت قادرة على نقل العدوى، وتخلص منها باتباع الاحتياطات اللازمة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تستخدم الفم أبدًا في عملية السحب. ارتدِ ملابس واقية مناسبة، ونظارات واقية، وقفازات. قائمة بجميع أنواع الأجسام المضادة البشرية الثلاثين المضمنة في لوحة BD® OMICS-One T-Cell: _____________________________________________________________________________ النوع المستنسخ معرف النيوكليوتيد رمز BD® AbSeq التسلسل الشريطي CD11b M1/70 AHS0005 ATCGTTATTCGTTGTAGTTCGCCCGGTTTGAGTAGT CD56 NCAM16.2 AHS0019 AGAGGTTGAGTCGTAATAATAATCGGAAGGCGTTGG CD38 HIT2 AHS0022 GTCAACGATGGGTAGCGGTAGAAATAACGGAACTGG CD27 M-T271 AHS0025 TGTCCGGTTTAGCGAATTGGGTTGAGTCACGTAGGT CD2 RPA-2.10 AHS0029 AAACGTAGATTAGAGCCGGGTATGTCGCAACTGATT CD16 3G8 AHS0053 تAATCTAATCGCGGTAACATAACGGTGGGTAAGGT CD184 (CXCR4) 12G5 AHS0060 CAGTGTTTAGAGCGGTTGCATATGTCGTTTAGAGG CD49d 9F10 AHS0063 TAGGGTGACTTAGCGATTGATGCGTATGTTTGGGCG CD314 (NKG2D) 1D11 AHS0065 TTGAAATGCGATGAGACGTAGAGCGATGTAGGTAGC CD335 (NKP46) 9E2/NKP46 AHS0068 CAATTTGTTCGCGTTTAGTAGTCGTCGTCTTATGGG CD54 HA58 AHS0076 AAGAGAATATATGCGTGCGTTGTTAGGGAATGCGT CD226 DX11 AHS0079 GAGTTTATGATTCGTTTCTTCGGTAGTTCGTCGCTT CD94 HP-3D9 AHS0085 GAGGTTAGGATAGGTGTACGGGTCGAGTTGAATTCT CD336 (NKP44) p44-8 AHS0090 AATGCAAACGATATCACGAAGGGTAGTACACGACGG CD49a SR84 AHS0101 ATGACACGAATGCGACGAGAGGCGAAATAGGTTGGT CX3CR1 2A9-1 AHS0125 GGGTTCACGAGGTTTAAAGCGGTAGTATAGGATGCC CD122 Mik-β3 AHS0146 TTAAAGAGATTCGTGGGTATTGGCGCAGTCATTCCT CD140b (PDGFR) 28D4 AHS0151 GACAACATTTAGGACGTGACGAGAGAGTATAGCTTC CD248 B1/35 AHS0156 ATCACTTATTTCGTTTGGAGGGTTCGTAGGCGTTGC CD63 H5C6 AHS0157 TGCAGCGTTAGGACCAAGCGTTTACCGTAGAATATT CD140a α-R1 AHS0160 تكتجاكتتكجاكجتجتجتتاكتتاججتتاتج CD31 (PECAM1) WM59 AHS0170 كتااججاكجتاتجاجتتكججتجاتكجكاجتتت CD96 6F9 AHS0194 كتاتجتاجاجكجاكجتتجججاكتاتاتجتتت CD161 (KLRB1) HP-3G10 AHS0205 تتاججاكجاتاجتجتجكجكاتاججاجتجتك CD158b (KIR) DX27 AHS0209 CGTAGGAGGATTTCGTCGATGGGTTTGTTAGCGTTC CD158e1 DX9 AHS0211 AGGTTCATTGCGGCATTAGGCGTCATATAGTAGGTG CD337/NKp30 P30-15 AHS0213 GGTAACTGACATGACGGAGCGATAATTTCTGGCGGT CD3 UCHT1 AHS0231 AGCTAGGTGTTATCGGCAAGTTGTACGGTGAAGTCG CD329(Siglec-9) E10-286 AHS0239 CGGGCGCGAAGATAGGATAATAGGTAACGTCAAATG CD106 51-10C9 AHS0251 TCTGATTTAGCGGGTGGACGTATTATAGTGATTGGC
إشعارات المنتج: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. خضعت عملية الإنتاج لاختبارات صارمة وتدقيق لضمان إنتاج مُركَّب عالي الجودة ذي أداء ثابت ونشاط ارتباط نوعي. مع ذلك، لم تُجرَ اختبارات التحقق على جميع دفعات المُركَّب. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics. للوصول إلى ملفات AbSeq المرجعية بصيغة FASTA لتحليلات المعلوماتية الحيوية، يُرجى زيارة https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/. تحذير: يُنتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. اتبع الإرشادات المحلية والولائية عند التخلص من النفايات الخطرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ مُعتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. اقرأ وافهم صحائف بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع المواد الكيميائية. للحصول على صحائف بيانات السلامة، تفضل بزيارة regdocs.bd.com أو تواصل مع الدعم الفني لشركة BD Biosciences عبر البريد الإلكتروني scomix@bd.com.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 1.0 : غير متوفر : غير متوفر