BD، 610523، مختبرات بي دي ترانسدكشن™، مضاد كالنيكسين نقي من الفئران

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الجرذ، الكلب (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري
المستضد: كالنيكسين بشري، الأحماض الأمينية 116-301
التطبيقات: لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)، التصوير الحيوي، الكيمياء المناعية النسيجية، الترسيب المناعي (يتم اختبارها أثناء التطوير)
الوزن الجزيئي المستهدف: 90 كيلو دالتون
التركيز: 250 ميكروغرام/مل
RRID: AB_397883
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA والجلسرين و ≤0.09٪ أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها للتصوير الحيوي: لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp. فيما يلي بروتوكول مختصر: 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بمعدل 10000 خلية تقريبًا لكل بئر في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219) واتركها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، واجعل الخلايا نفاذة باستخدام إما محلول BD Phosflow™ Perm III، أو ميثانول 90%، أو Triton™ X-100: أ. أضف 100 ميكرولتر من محلول Perm Buffer III المبرد عند درجة حرارة -20 درجة مئوية (رقم المنتج 558050) أو 90% ميثانول إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أو ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول Triton™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل محلول النفاذية، واغسل الآبار مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من محلول PBS بتركيز 1×. 5. أزل محلول PBS، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) إلى كل بئر. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. أزل محلول الحجب، وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد الأولي المُعاير الأمثل (المخفف في محلول التلوين) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٧. أزل الجسم المضاد الأولي، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٨. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، وأضف ٥٠ ميكرولتر من كاشف الخطوة الثانية بتركيزه المُعاير الأمثل إلى كل بئر، ثم حضّن في الظلام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٩. أزل كاشف الخطوة الثانية، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ١٠. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ثم قم بتلوين النوى بإضافة ٢٠٠ ميكرولتر لكل بئر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١×، وذلك قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١١. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. لطخة ويسترن: لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml
إشعارات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. تريتون علامة تجارية لشركة داو كيميكال. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.