مجموعة CST، 12267S، PTMScan® Phospho-ATM/ATR Substrate Motif [pSQ]

برنامج PTMScan للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج تُحلل الخلايا في محلول منظم يحتوي على اليوريا، وتُهضم البروتينات الخلوية بواسطة إنزيمات البروتياز، ثم تُنقى الببتيدات الناتجة باستخدام استخلاص الطور الصلب ذي الطور المعكوس. بعد ذلك، تُخضع الببتيدات لتنقية المناعة باستخدام جسم مضاد PTMScan® Motif مرتبط بخرزات بروتين A أجاروز. تُزال الببتيدات غير المرتبطة بالغسل، وتُستخلص الببتيدات الحاملة لتعديلات ما بعد الترجمة (PTM) باستخدام حمض مخفف. تُجرى عملية تنقية الطور المعكوس على رؤوس دقيقة لإزالة الأملاح وفصل الببتيدات عن الجسم المضاد قبل تركيز الببتيدات المُثرية لتحليلها بتقنية LC-MS/MS. توصي شركة CST باستخدام محلول PTMScan® IAP رقم 9993 المرفق مع المجموعة. تخزين تُزوَّد حبيبات الأجسام المضادة في محلول منظم IAP يحتوي على 50% جلسرين. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: PTMScan خلفية تستخدم تقنية PhosphoScan أجسامًا مضادة ذات نمط فوسفوري (Tyr، Ser، Thr) لتنقية الببتيدات الفوسفورية من مستخلصات الخلايا بتقنية المناعة التقاربية، مقترنةً بتقنية LC-MS/MS لتحديد وقياس التغيرات في مستويات الفسفرة (1). يُعد كل من كيناز الطفرة في رنح توسع الشعيرات (ATM) وكيناز رنح توسع الشعيرات المرتبط بـ Rad3 (ATR) كينازات متشابهة تنظم نقاط تفتيش دورة الخلية وإصلاح الحمض النووي (2). تشمل الركائز المحددة لـ ATM: p53، وp95/NBS1، وMDM2، وChk2، وBRCA1، وCtIP، و4E-BP1، وChk1 (2، 3). التسلسل المتفق عليه لركائز ATM/ATR هو [pS/pTQ]. تُعد الأحماض الأمينية الكارهة للماء في الموضعين -3 و-1، والأحماض الأمينية سالبة الشحنة في الموضع +1، عوامل محددة إيجابية لتعرف هذه الكينازات على الركائز. تُعدّ البقايا المشحونة إيجابًا المحيطة بـ [pS/pTQ] عوامل مُثبِّطة لفسفرة الركيزة (4). ويشير النمط الظاهري المُعقَّد لخلايا AT إلى احتمال وجود ركائز إضافية لها (4). ولتحسين فهمنا للكيناز وتحديد ركائز ATM والكيناز ATR ذي الصلة، قمنا بتطوير أجسام مضادة تتعرف على السيرين أو الثريونين المُفسفر في وحدة [pS/pTQ].