CST، 13292S، SignalSilence® PKC alpha siRNA I

استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) لدراسة بروتين كيناز ألفا (PKCalpha) في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج توصي شركة CST بإجراء عملية نقل الجينات باستخدام 100 نانومتر من SignalSilence® PKC alpha siRNA I قبل 48 إلى 72 ساعة من تحلل الخلايا. لإجراء عملية نقل الجينات، اتبع البروتوكول المقدم من الشركة المصنعة لكاشف نقل الجينات. لا تتردد في الاتصال بشركة CST لأي استفسارات حول الاستخدام. تحتوي كل قارورة على ما يعادل 100 عملية نقل جينات، وهو ما يتوافق مع تركيز نهائي لـ siRNA يبلغ 100 نانومتر لكل عملية نقل جينات في صفيحة ذات 24 بئراً بحجم إجمالي 300 ميكرولتر لكل بئر. تخزين يُزوَّد منتج SignalSilence® siRNA في ماء خالٍ من إنزيم RNase. قسّم المنتج إلى حصص صغيرة وخزّنها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية يُعدّ تنشيط بروتين كيناز C (PKC) من أوائل الأحداث في سلسلة تفاعلات تتحكم في مجموعة متنوعة من الاستجابات الخلوية، بما في ذلك الإفراز، والتعبير الجيني، والتكاثر، وانقباض العضلات (1، 2). تنتمي نظائر PKC إلى ثلاث مجموعات بناءً على اعتمادها على الكالسيوم والمنشطات. تعتمد PKC الكلاسيكية على الكالسيوم عبر نطاقاتها C2، ويتم تنشيطها بواسطة فوسفاتيديل سيرين (PS)، وثنائي أسيل جليسرول (DAG)، وإسترات الفوربول (TPA، PMA) من خلال نطاقاتها C1 الغنية بالسيستين. أما PKC الحديثة وغير النمطية، فهي مستقلة عن الكالسيوم، ولكن PKC الحديثة فقط هي التي يتم تنشيطها بواسطة PS وDAG وإسترات الفوربول (3-5). تحتوي أفراد هذه المجموعات الثلاث من PKC على نطاق شبه ركيزة أو نطاق تثبيط ذاتي يرتبط بمواقع ارتباط الركيزة في النطاق التحفيزي لمنع التنشيط في غياب العوامل المساعدة أو المنشطات. يتم تنظيم نشاط بروتين كيناز C (PKC) من خلال ثلاث عمليات فسفرة متميزة. تحدث الفسفرة عند الثريونين 500 في حلقة التنشيط، وعند الثريونين 641 من خلال الفسفرة الذاتية، وعند الموقع الكاره للماء في الطرف الكربوكسيلي عند السيرين 660 (2). تفتقر نظائر PKC غير النمطية إلى فسفرة المنطقة الكارهة للماء، وهو ما يرتبط بوجود حمض الجلوتاميك بدلاً من بقايا السيرين أو الثريونين الموجودة في نظائر PKC الأكثر نمطية. إنزيم PDK1 أو أحد أقاربه مسؤول عن تنشيط PKC. يُعد PKCμ (PKD) إضافة حديثة إلى عائلة PKC الفائقة، ويتم تنظيمه بواسطة ثنائي أسيل جليسرول (DAG) وTPA من خلال نطاقه C1. يتميز PKD بوجود نطاق PH وبقدرته الفريدة على التعرف على الركيزة وتمركزه في جهاز جولجي (6). تفتقر كينازات PKC المرتبطة (PRK) إلى نطاق C1 ولا تستجيب لثنائي أسيل جليسرول أو إسترات الفوربول. تقوم دهون الفوسفاتيديل إينوزيتول بتنشيط PRKs، وترتبط GTPases الصغيرة من عائلة Rho بمنطقة التماثل 1 (HR1) لتنظيم نشاط كيناز PRK (7). مواصفة التفاعل: H