CST، 13499T، Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) جسم مضاد أحادي النسيلة من الأرانب

جسم مضاد أحادي النسيلة لدراسة فوسفات POLR2A (Ser1616). مُعتمد للاستخدام في تقنيات WB وWB وIP وChIP وC&R وC&T. متوفر بحجمين. يتميز الجسم المضاد أحادي النسيلة Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) المُستخلص من الأرانب (CST #13499) بدقة عالية وخضع لاختبارات داخلية صارمة، وهو جاهز للشحن. معلومات استخدام المنتج للحصول على أفضل نتائج في تقنيتي ChIP وChIP-seq، استخدم 10 ميكرولتر من الجسم المضاد و10 ميكروغرام من الكروماتين (ما يعادل تقريبًا 4 × 10⁶ خلية) لكل عملية ترسيب مناعي. تم التحقق من صحة هذا الجسم المضاد باستخدام مجموعات SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP. تم تحديد تخفيف CUT&RUN باستخدام مجموعة CUT&RUN Assay Kit رقم 86652. تم تحديد تخفيف CUT&Tag باستخدام مجموعة CUT&Tag Assay Kit رقم 77552. اللطخة الغربية: 1:1000 Simple Western™: 1:10 - 1:50 الترسيب المناعي: 1:50 كروماتين IP: 1:50 تسلسل الحمض النووي للكروماتين: 1:50 قطع وهروب: 1:50 قص ولصق: 1:50 تخزين يُباع في محلول يحتوي على 10 ملي مولار من هيبس الصوديوم (الأس الهيدروجيني 7.5)، و150 ملي مولار من كلوريد الصوديوم، و100 ميكروغرام/مل من ألبومين المصل البقري، و50% جلسرين، وأقل من 0.02% أزيد الصوديوم. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. للحصول على نسخة خالية من الحامل (خالية من ألبومين المصل البقري والأزيد)، يُرجى مراجعة المنتج رقم 31624. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: لطخة ويسترن، الترسيب المناعي، ترسيب الكروماتين المناعي، تسلسل ترسيب الكروماتين المناعي، CUT&RUN، CUT&Tag النوعية / الحساسية يتعرف الجسم المضاد أحادي النسيلة للأرانب Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) على المستويات الذاتية لبروتين Rpb1 فقط عندما يكون تكرار الببتيد السباعي في نطاق الكربوكسيل الطرفي (CTD) [Tyr1, Ser2, Pro3, Thr4, Ser5, Pro6, Ser7] مُفسفرًا عند Ser2. لا يتفاعل هذا الجسم المضاد مع نطاق الكربوكسيل الطرفي (CTD) لبروتين Rpb1 المُفسفر عند Ser5 أو Ser7. التفاعل مع الأنواع: الإنسان، الفأر، الجرذ، القرد المصدر / التنقية يتم إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق تحصين الحيوانات بببتيد فسفوري اصطناعي يتوافق مع البقايا المحيطة بـ Ser2 من تكرار الببتيد السباعي CTD البشري Rpb1. خلفية إن بوليميراز الحمض النووي الريبي II (RNAPII) هو مُركّب بروتيني ضخم مُتعدد يعمل كبوليميراز حمض نووي ريبي مُعتمد على الحمض النووي، حيث يُحفّز نسخ الحمض النووي إلى الحمض النووي الريبي باستخدام أربعة نيوكليوتيدات ريبية ثلاثية الفوسفات كركائز (1). تحتوي الوحدة الفرعية الأكبر، وهي الوحدة الفرعية B1 من بوليميراز الحمض النووي الريبي II (Rpb1)، والمعروفة أيضًا باسم الوحدة الفرعية A من بوليميراز الحمض النووي الريبي II (POLR2A)، على تسلسل ببتيدي سباعي فريد (Tyr1,Ser2,Pro3,Thr4,Ser5,Pro6,Ser7)، والذي يتكرر حتى 52 مرة في النطاق الطرفي الكربوكسيلي (CTD) للبروتين (1). يخضع هذا التكرار الببتيدي السباعي في النطاق الطرفي الكربوكسيلي لتعديلات ما بعد الترجمة المتعددة، والتي تُحدد الحالة الوظيفية لمُركّب البوليميراز. تُدمج فسفرة النطاق الطرفي الكربوكسيلي (CTD) خلال دورة النسخ النشطة عملية النسخ مع إعادة تشكيل الكروماتين ومعالجة الحمض النووي الريبوزي الوليد، وذلك من خلال تنظيم استقطاب إنزيمات تعديل الكروماتين وبروتينات معالجة الحمض النووي الريبوزي إلى الجين المنسوخ (1). أثناء بدء النسخ، يحتوي بوليميراز الحمض النووي الريبوزي II (RNAPII) على نطاق طرفي كربوكسيلي منخفض الفسفرة، ويتم استقطابه إلى محفزات الجينات من خلال التفاعلات مع عوامل النسخ المرتبطة بالحمض النووي ومركب الوسيط (1). يتطلب انفصال بوليميراز الحمض النووي الريبوزي II عن محفزات الجينات فسفرة عند سيرين 5 بواسطة CDK7، الوحدة الفرعية المحفزة لعامل النسخ IIH (TFIIH) (2). تُسهّل الفسفرة عند سيرين 5 استقطاب إنزيمات إضافة غطاء الحمض النووي الريبوزي، بالإضافة إلى ناقلات ميثيل الهيستون H3 Lys4، والتي تعمل على تنظيم بدء النسخ وبنية الكروماتين (3، 4). بعد هروب المحفز، يتابع بوليميراز الحمض النووي الريبي II (RNAPII) مساره على طول الجين وصولًا إلى موقع توقف داخلي، حيث يتوقف بفعل عاملي الاستطالة السلبيين NELF وDSIF (5). عند هذه النقطة، يكون RNAPII غير مستقر، وغالبًا ما يُجهض عملية النسخ وينفصل عن الجين. تتطلب استطالة النسخ الفعالة فسفرة عند Ser2 بواسطة CDK9، الوحدة الفرعية المحفزة لعامل استطالة النسخ الإيجابي P-TEFb (6). تُنشئ الفسفرة عند Ser2 مُركب استطالة نسخ مستقرًا، وتُسهل استقطاب عوامل ربط الحمض النووي الريبي وعوامل إضافة ذيل عديد الأدينين، بالإضافة إلى ناقلات ميثيل الهيستون H3 Lys36، التي تعمل على تعزيز الكروماتين المتوافق مع الاستطالة (7، 8). بعد ذلك، يقوم RNAPII المُفسفر عند Ser2/Ser5 بنسخ كامل طول الجين حتى النهاية 3'، حيث تنتهي عملية النسخ. ينفصل بوليميراز الحمض النووي الريبي II (RNAPII) عن الحمض النووي (DNA) ويُعاد تدويره إلى شكله غير المُفسفر بواسطة فوسفاتازات مختلفة في نطاق CTD (1). بالإضافة إلى فسفرة Ser2/Ser5، تُفسفر Ser7 في تكرار الببتيد السباعي لنطاق CTD أيضًا خلال دورة النسخ النشطة. تُعد الفسفرة عند Ser7 ضرورية لنسخ جينات الحمض النووي الريبي النووي الصغير (snRNA) بكفاءة (9، 10). تختلف جينات snRNA، التي لا تخضع لعملية التضفير ولا تُضاف إليها ذيل عديد الأدينين، بنيويًا عن الجينات المُشفِّرة للبروتين. فبدلًا من إشارة عديد الأدينين الموجودة في الحمض النووي الريبي المُشفِّر للبروتين، تحتوي جينات snRNA على عنصر معالجة RNA محفوظ من نوع 3'-box، والذي يتعرف عليه مُركب معالجة الطرف 3' لجين snRNA المتكامل (11، 12). يؤدي الفسفرة عند Ser7 بواسطة CDK7 خلال المراحل المبكرة من النسخ إلى تسهيل تجنيد RPAP2، ​​الذي يقوم بإزالة الفسفرة من Ser5، مما يؤدي إلى إنشاء علامة فسفرة مزدوجة Ser2/Ser7 تسهل تجنيد مركب Integrator والمعالجة الفعالة لنسخ snRNA الناشئة (13-15). أسماء بديلة أكبر وحدة فرعية من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي، الوحدة الفرعية 220 كيلو دالتون من بوليميراز الحمض النووي الريبي II؛ الوحدة الفرعية A من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي؛ الوحدة الفرعية RPB1 من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي؛ أكبر وحدة فرعية من بوليميراز الحمض النووي الريبي III الموجه بالحمض النووي؛ hRPB220؛ hsRPB1؛ MGC75453؛ NEDHIB؛ POL II؛ POLR2؛ POLR2A؛ POLRA؛ عديد الببتيد A من بوليميراز (RNA) II (الموجه بالحمض النووي) 220 كيلو دالتون؛ الوحدة الفرعية A من بوليميراز (RNA) II؛ الوحدة الفرعية A من بوليميراز الحمض النووي الريبي II؛ الوحدة الفرعية B1 من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي الريبي؛ RNAPII؛ RPB1؛ RPBh1؛ RpIILS؛ RPO2؛ RPOL2 مواصفة التفاعل: HMR Mk الحساسية: داخلية المنشأ الوزن الجزيئي (كيلودالتون): 250 المصدر/النمط المصلي: IgG الأرنب