مجموعة CST، 14482S، PTMScan® Pilot Ubiquitin Remnant Motif (K-epsilon-GG)

برنامج PTMScan للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج تُحلل الخلايا في محلول منظم يحتوي على اليوريا، وتُهضم البروتينات الخلوية بواسطة إنزيمات البروتياز، ثم تُنقى الببتيدات الناتجة باستخدام استخلاص الطور الصلب ذي الطور المعكوس. بعد ذلك، تُخضع الببتيدات لتنقية المناعة باستخدام جسم مضاد PTMScan® Motif مرتبط بخرزات بروتين A أجاروز. تُزال الببتيدات غير المرتبطة بالغسل، وتُستخلص الببتيدات الحاملة لتعديلات ما بعد الترجمة (PTM) باستخدام حمض مخفف. تُجرى عملية تنقية الطور المعكوس على رؤوس دقيقة لإزالة الأملاح وفصل الببتيدات عن الجسم المضاد قبل تركيز الببتيدات المُثرية لتحليلها بتقنية LC-MS/MS. توصي شركة CST باستخدام محلول PTMScan® IAP رقم 9993 المرفق مع المجموعة. يحتوي طقم PTMScan ® Pilot Ubiquitin Remnant Motif (K-epsilon-GG) على إصدار خرز مغناطيسي ذي حساسية وخصوصية أعلى: طقم PTMScan ® HS Ubiquitin/SUMO Remnant Motif (K-epsilon-GG) بتنسيق 10 فحوصات (#59322) أو 3 فحوصات (#19089)، بالإضافة إلى تنسيق الخرز فقط (#34608). تخزين تُزوَّد حبيبات الأجسام المضادة في محلول منظم IAP يحتوي على 50% جلسرين. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: PTMScan خلفية اليوبيكويتين وحدة ببتيدية محفوظة تلعب دورًا هامًا في مسار اليوبيكويتين-بروتيازوم. يرتبط اليوبيكويتين تساهميًا بالعديد من البروتينات الخلوية عبر عملية اليوبيكويتين، التي تستهدف البروتينات لتحللها بواسطة البروتيازوم 26S. تتضمن عملية اقتران اليوبيكويتين بالبروتين المستهدف ثلاثة مكونات. يُنشط اليوبيكويتين أولًا بتكوين معقد ثيول إستر مع مكون التنشيط E1؛ ثم يُنقل اليوبيكويتين المنشط إلى بروتين حامل اليوبيكويتين E2، ومن E2 إلى إنزيم ربط اليوبيكويتين E3 لتوصيله النهائي إلى مجموعة الأمين (ε-NH2) في بقايا الليسين (2-4) من البروتين المستهدف. وقد ثبت تورط مسار اليوبيكويتين-بروتيازوم في نطاق واسع من العمليات البيولوجية الطبيعية وفي التشوهات المرتبطة بالأمراض. أظهرت العديد من البروتينات، مثل IκB وp53 وcdc25a وbcl-2، أنها أهداف لعملية اليوبيكويتين-بروتيازوم كجزء من تنظيم تقدم دورة الخلية، والتمايز، والاستجابة للإجهاد الخلوي، والاستماتة (5-8). في هذا الاختبار، يُستخدم مُقترن خرز الأجسام المضادة PTMScan Ubiquitin Remnant Motif (K-ε-GG)، وهو جسم مضاد خاص بفرع اليوبيكويتين ("K-ε-GG") يتميز بخصوصية علامة ثنائي الجليسين، وهي بقايا اليوبيكويتين المتبقية على ركائز البروتين بعد هضم التربسين، لإثراء الببتيدات المُيوبيكويتينية من عينات الخلايا المهضومة بالتربسين. يتبع هذا الإثراء تحليل LC-MS/MS للحصول على بيانات كمية لمئات إلى أكثر من ألف تسلسل مُيوبيكويتيني غير متكرر.