CST، 14934S، جسم مضاد لـ Phospho-Rpb1 CTD (Thr4)

جسم مضاد متعدد النسائل لدراسة فوسفات POLR2A (Thr1618). مُعتمد للاستخدام في تقنية Western Blotting. يتميز هذا الجسم المضاد Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) (CST #14934) بدرجة عالية من التخصص، وقد خضع لاختبارات داخلية دقيقة، وهو جاهز للشحن. معلومات استخدام المنتج اللطخة الغربية: 1:1000 تخزين يُزوَّد المنتج في محلول يحتوي على 10 ملي مولار من هيبس الصوديوم (الأس الهيدروجيني 7.5)، و150 ملي مولار من كلوريد الصوديوم، و100 ميكروغرام/مل من ألبومين المصل البقري، و50% من الجلسرين. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: لطخة ويسترن النوعية / الحساسية يتعرف الجسم المضاد Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) على مستويات بروتين Rpb1 الذاتية فقط عندما يكون تكرار الببتيد السباعي في نطاق الكربوكسيل الطرفي (CTD) [Tyr1, Ser2, Pro3, Thr4, Ser5, Pro6, Ser7] مُفسفرًا عند Thr4. ولا يتفاعل هذا الجسم المضاد مع نطاق الكربوكسيل الطرفي (CTD) لبروتين Rpb1 المُفسفر عند Ser2 أو Ser5 أو Ser7. التفاعل مع الأنواع: الإنسان، الفأر، الجرذ، القرد المصدر / التنقية يتم إنتاج الأجسام المضادة متعددة النسائل عن طريق تحصين الحيوانات بببتيد فسفوري اصطناعي يُطابق الأحماض الأمينية المحيطة بالثريونين 4 في تكرار الببتيد السباعي لنطاق Rpb1 CTD البشري. تُنقى الأجسام المضادة باستخدام كروماتوغرافيا تقارب البروتين A والببتيد. خلفية إن بوليميراز الحمض النووي الريبي II (RNAPII) هو مُركّب بروتيني ضخم مُتعدد يعمل كبوليميراز حمض نووي ريبي مُعتمد على الحمض النووي، حيث يُحفّز نسخ الحمض النووي إلى الحمض النووي الريبي باستخدام أربعة نيوكليوتيدات ريبية ثلاثية الفوسفات كركائز (1). تحتوي الوحدة الفرعية الأكبر، وهي الوحدة الفرعية B1 من بوليميراز الحمض النووي الريبي II (Rpb1)، والمعروفة أيضًا باسم الوحدة الفرعية A من بوليميراز الحمض النووي الريبي II (POLR2A)، على تسلسل ببتيدي سباعي فريد (Tyr1,Ser2,Pro3,Thr4,Ser5,Pro6,Ser7)، والذي يتكرر حتى 52 مرة في النطاق الطرفي الكربوكسيلي (CTD) للبروتين (1). يخضع هذا التكرار الببتيدي السباعي في النطاق الطرفي الكربوكسيلي لتعديلات ما بعد الترجمة المتعددة، والتي تُحدد الحالة الوظيفية لمُركّب البوليميراز. تُدمج فسفرة النطاق الطرفي الكربوكسيلي (CTD) خلال دورة النسخ النشطة عملية النسخ مع إعادة تشكيل الكروماتين ومعالجة الحمض النووي الريبوزي الوليد، وذلك من خلال تنظيم استقطاب إنزيمات تعديل الكروماتين وبروتينات معالجة الحمض النووي الريبوزي إلى الجين المنسوخ (1). أثناء بدء النسخ، يحتوي بوليميراز الحمض النووي الريبوزي II (RNAPII) على نطاق طرفي كربوكسيلي منخفض الفسفرة، ويتم استقطابه إلى محفزات الجينات من خلال التفاعلات مع عوامل النسخ المرتبطة بالحمض النووي ومركب الوسيط (1). يتطلب انفصال بوليميراز الحمض النووي الريبوزي II عن محفزات الجينات فسفرة عند سيرين 5 بواسطة CDK7، الوحدة الفرعية المحفزة لعامل النسخ IIH (TFIIH) (2). تُسهّل الفسفرة عند سيرين 5 استقطاب إنزيمات إضافة غطاء الحمض النووي الريبوزي، بالإضافة إلى ناقلات ميثيل الهيستون H3 Lys4، والتي تعمل على تنظيم بدء النسخ وبنية الكروماتين (3، 4). بعد هروب المحفز، يتابع بوليميراز الحمض النووي الريبي II (RNAPII) مساره على طول الجين وصولًا إلى موقع توقف داخلي، حيث يتوقف بفعل عاملي الاستطالة السلبيين NELF وDSIF (5). عند هذه النقطة، يكون RNAPII غير مستقر، وغالبًا ما يُجهض عملية النسخ وينفصل عن الجين. تتطلب استطالة النسخ الفعالة فسفرة عند Ser2 بواسطة CDK9، الوحدة الفرعية المحفزة لعامل استطالة النسخ الإيجابي P-TEFb (6). تُنشئ الفسفرة عند Ser2 مُركب استطالة نسخ مستقرًا، وتُسهل استقطاب عوامل ربط الحمض النووي الريبي وعوامل إضافة ذيل عديد الأدينين، بالإضافة إلى ناقلات ميثيل الهيستون H3 Lys36، التي تعمل على تعزيز الكروماتين المتوافق مع الاستطالة (7، 8). بعد ذلك، يقوم RNAPII المُفسفر عند Ser2/Ser5 بنسخ كامل طول الجين حتى النهاية 3'، حيث تنتهي عملية النسخ. ينفصل بوليميراز الحمض النووي الريبي II (RNAPII) عن الحمض النووي (DNA) ويُعاد تدويره إلى شكله غير المُفسفر بواسطة فوسفاتازات مختلفة في نطاق CTD (1). بالإضافة إلى فسفرة Ser2/Ser5، تُفسفر Ser7 في تكرار الببتيد السباعي لنطاق CTD أيضًا خلال دورة النسخ النشطة. تُعد الفسفرة عند Ser7 ضرورية لنسخ جينات الحمض النووي الريبي النووي الصغير (snRNA) بكفاءة (9، 10). تختلف جينات snRNA، التي لا تخضع لعملية التضفير ولا تُضاف إليها ذيل عديد الأدينين، بنيويًا عن الجينات المُشفِّرة للبروتين. فبدلًا من إشارة عديد الأدينين الموجودة في الحمض النووي الريبي المُشفِّر للبروتين، تحتوي جينات snRNA على عنصر معالجة RNA محفوظ من نوع 3'-box، والذي يتعرف عليه مُركب معالجة الطرف 3' لجين snRNA المتكامل (11، 12). يُسهّل الفسفرة عند Ser7 بواسطة CDK7 خلال المراحل المبكرة من النسخ استقطاب RPAP2، ​​الذي يُزيل الفسفرة من Ser5، مُنشئًا علامة فسفرة مزدوجة Ser2/Ser7 تُسهّل استقطاب مُركّب Integrator والمعالجة الفعّالة لنسخ snRNA الوليدة (13-15). تُعدّ فسفرة تكرار الببتيد السباعي في نطاق Rpb1 CTD عند Thr4 محفوظةً بشكلٍ كبير من الخميرة إلى الثدييات. مع ذلك، تُشير الدراسات البحثية التي تستخدم بروتينات Rpb1 المُتحوّرة في فسفرة Thr4 إلى أدوارٍ مُختلفة لهذا التعديل بين الأنواع. في حين أن فسفرة Thr4 في ​​الخميرة ليست ضرورية (16، 17)، فإن طفرات Thr4 في ​​الدجاج والثدييات تُؤدّي إلى أخطاء في معالجة RNA وعيوبٍ شاملة في استطالة RNA (18، 19). يتم فسفرة الثريونين 4 بشكل مباشر بواسطة بولو كيناز 3 (PLK3) ويعتقد أن نشاط كيناز 9 المعتمد على السيكلين (CDK9) يؤدي إما بشكل مباشر أو غير مباشر إلى فسفرة هذا الموقع (18،19). أسماء بديلة أكبر وحدة فرعية من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي، الوحدة الفرعية 220 كيلو دالتون من بوليميراز الحمض النووي الريبي II؛ الوحدة الفرعية A من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي؛ الوحدة الفرعية RPB1 من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي؛ أكبر وحدة فرعية من بوليميراز الحمض النووي الريبي III الموجه بالحمض النووي؛ hRPB220؛ hsRPB1؛ MGC75453؛ NEDHIB؛ POL II؛ POLR2؛ POLR2A؛ POLRA؛ عديد الببتيد A من بوليميراز (RNA) II (الموجه بالحمض النووي) 220 كيلو دالتون؛ الوحدة الفرعية A من بوليميراز (RNA) II؛ الوحدة الفرعية A من بوليميراز الحمض النووي الريبي II؛ الوحدة الفرعية B1 من بوليميراز الحمض النووي الريبي II الموجه بالحمض النووي الريبي؛ RNAPII؛ RPB1؛ RPBh1؛ RpIILS؛ RPO2؛ RPOL2 مواصفة التفاعل: HMR Mk الحساسية: داخلية المنشأ الوزن الجزيئي (كيلودالتون): 250 المصدر: أرنب