مجموعة CST، 17848S، PTMScan® بروبيونيل-لايسين [بروب-كيه]

برنامج PTMScan للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج تُحلل الخلايا في محلول منظم يحتوي على اليوريا، وتُهضم البروتينات الخلوية بواسطة إنزيمات البروتياز، ثم تُنقى الببتيدات الناتجة باستخدام استخلاص الطور الصلب ذي الطور المعكوس. بعد ذلك، تُخضع الببتيدات لتنقية المناعة باستخدام جسم مضاد PTMScan® Motif مرتبط بخرزات بروتين A أجاروز. تُزال الببتيدات غير المرتبطة بالغسل، وتُستخلص الببتيدات الحاملة لتعديلات ما بعد الترجمة (PTM) باستخدام حمض مخفف. تُجرى عملية تنقية الطور المعكوس على رؤوس دقيقة لإزالة الأملاح وفصل الببتيدات عن الجسم المضاد قبل تركيز الببتيدات المُثرية لتحليلها بتقنية LC-MS/MS. توصي شركة CST باستخدام محلول PTMScan® IAP رقم 9993 المرفق مع المجموعة. تخزين تُزوَّد حبيبات الأجسام المضادة في محلول منظم IAP يحتوي على 50% جلسرين. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: PTMScan خلفية يخضع الليسين لمجموعة واسعة من التعديلات التنظيمية اللاحقة للترجمة نظرًا لسلسلة الأمينو الجانبية الموجبة الشحنة. ومن أبرز هذه التعديلات اليوبيكويتين والأسيتلة، وهما عمليتان محفوظتان بدرجة عالية بين بدائيات النوى وحقيقيات النوى (1، 2). يعمل نقل مجموعة الأسيل من وسائط الأيض، مثل أسيتيل-CoA، وسكسينيل-CoA، ومالونيل-CoA، وغلوتاريل-CoA، وبيوتيريل-CoA، وبروبيونيل-CoA، على معادلة الشحنة الموجبة لليسين وإحداث تغييرات بنيوية تؤثر على وظيفة البروتين الركيزة. يتم تحفيز أسيتلة الليسين بواسطة إنزيمات أسيتيل ترانسفيراز الهيستون (HATs)، باستخدام أسيتيل-CoA كعامل مساعد (3، 4). أما إزالة الأسيل فتتم بوساطة إنزيمات دي أسيتيل الهيستون (HDACs 1-11) وسيرتوينات 1-7 المعتمدة على NAD. بعض السيرتوينات لا تمتلك نشاطًا يُذكر في إزالة الأسيتيل، مما يشير إلى أنها أكثر ملاءمة لركائز أسيل الليسين الأخرى (5). وقد أُبلغ عن نشاط نقل البروبيونيل والبيوتيريل البروتيني لبروتين p300 وبروتين ربط CREB، وهما إنزيمان ناقلان للأسيتيل قادران على إضافة الأسيتيل ذاتيًا، بالإضافة إلى استهداف بروتينات الهيستون وبروتين p53. وقد ثبت أن Sirt1 (Sir2 في الخميرة) يمتلك نشاط إزالة البروبيونيل، وقد يكون إنزيمًا رئيسيًا لإزالة البروبيونيل في حقيقيات النوى (6، 7). في السيتوسول، يحول إنزيم أسيتيل-CoA كربوكسيلاز (ACC) أسيتيل-CoA إلى مالونيل-CoA، ويُحفز التفاعل العكسي بواسطة إنزيم مالونيل-CoA ديكاربوكسيلاز (MCD)، ولكن في الميتوكوندريا، يتولى إنزيم بروبيونيل-CoA كربوكسيلاز دور ACC. يتم تنظيم كل من MCD و ACC بواسطة AMPK ومستويات الجلوكوز والأنسولين، مما يؤكد أهميتهما في عملية التمثيل الغذائي الوسيط (8). أسماء بديلة أسيل؛ أسيلة؛ بروبيونيل؛ PTMScan