CST، 20432L، PTMScan® خرز مغناطيسي مُخصب بالفوسفور بتقنية IMAC Fe-NTA

كواشف التقارب والتنقية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج تُحلل الخلايا في محلول منظم يحتوي على اليوريا، وتُهضم البروتينات الخلوية بواسطة إنزيمات البروتياز، ثم تُنقى الببتيدات الناتجة باستخدام استخلاص الطور الصلب ذي الطور المعكوس. بعد ذلك، تُخضع الببتيدات الفوسفورية لعملية إثراء باستخدام خرز PTMScan® IMAC. تُزال الببتيدات غير المرتبطة بالغسل، وتُستخلص الببتيدات الفوسفورية المحتجزة باستخدام محلول منظم قاعدي. تُجرى عملية تنقية الطور المعكوس على رؤوس دقيقة لإزالة الأملاح وفصل الببتيدات عن الشوائب قبل تركيز الببتيدات المُثرية لتحليلها بتقنية LC-MS/MS. يتضمن الجدول بروتوكولًا مفصلًا مرفقًا مع الخرز. تخزين تُزوَّد خرزات IMAC Fe-NTA المغناطيسية في محلول إيثانول بتركيز 20%. للتخزين طويل الأمد، استبدل المحلول بمحلول تخزين طويل الأمد (1:1:1 حجم/حجم/حجم من الميثانول، والأسيتونيتريل، وحمض الأسيتيك بتركيز 0.01%). راجع البروتوكول لمزيد من التفاصيل. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لا تُجمّد الخرزات. خلفية تُستخدم تقنية كروماتوغرافيا تقارب المعادن المُثبَّتة (IMAC) على نطاق واسع لإثراء البروتينات والببتيدات من العينات البيولوجية عن طريق الارتباط بمجموعات من الشحنات السالبة. تُستخدم أيونات المعادن الانتقالية ثنائية التكافؤ، مثل الكوبالت والنحاس والنيكل والزنك، بشكل شائع لتنقية البروتينات الغنية بالهيستيدين المتعدد أو السيستين، بالإضافة إلى البروتينات ذات الألفة للمعادن. أما أيونات المعادن ثلاثية التكافؤ، مثل الحديد والغاليوم والألومنيوم، بالإضافة إلى التيتانيوم والزركونيوم، فتُستخدم عادةً لإثراء الببتيدات الفوسفورية في الدراسات البروتينية (1). يُستخدم حمض الإيمينوداياسيتيك (IDA) أو حمض النيتريلوترياسيتيك (NTA) لربط أيونات المعادن بخرزات مغلفة بالأغاروز. وقد أظهرت الدراسات المقارنة أن NTA يتفوق على IDA في الانتقاء والتعرف على عدد أكبر من الببتيدات الفوسفورية. أما الغاليوم والحديد، فهما متقاربان من حيث عدد الببتيدات الفوسفورية التي تم تحديدها (2). بالمقارنة مع كروماتوغرافيا تقارب أكسيد المعادن (MOAC) باستخدام ثاني أكسيد التيتانيوم (TiO₂)، أظهرت كروماتوغرافيا تقارب الحديد (Fe IMAC) أداءً أفضل بشكل طفيف، حيث يُفضل ثاني أكسيد التيتانيوم الببتيدات الفوسفورية الحمضية (pI > 4) مقارنةً بالحديد الذي يُفضل الببتيدات الأقل حمضية (pI < 4) (3). تُوفر خرزات PTMScan Fe-NTA المغناطيسية أداة فعالة لإثراء الببتيدات الفوسفورية مع تحيز ضئيل أو معدوم لسياق بقايا الفوسفور. يُمكن استخدامها بشكل مستقل أو بالتزامن مع الإثراء القائم على التقارب المناعي لاستكمال أي دراسة بروتينية باستخدام تقنية PhosphoScan LC-MS/MS. أسماء بديلة الإثراء القائم على الحديد؛ IMAC؛ معدن مثبت؛ ألفة المعدن؛ الإثراء القائم على المعدن؛ MOAC؛ ببتيد فسفوري؛ بروتينات فسفورية؛ pSTY؛ TiO2