CST، 25243L، محلول معزز استخلاص الخلايا بتقنية ELISA FastScan™ (50X)

مساحة احتياطية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج محلول استخلاص الخلايا 1X: يُحضّر بتخفيف محلول استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (5X) رقم 69905 ومحلول مُحسِّن استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (50X) رقم 25243* إلى تركيز 1X باستخدام الماء منزوع الأيونات. يُمكن تخزين هذا المحلول عند درجة حرارة 4 مئوية للاستخدام قصير الأمد (1-2 أسبوع). لتحضير 10 مل من محلول استخلاص الخلايا 1X، امزج 7.8 مل من الماء منزوع الأيونات، و2 مل من محلول استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (5X)، و200 ميكرولتر من محلول مُحسِّن استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (50X). بدلاً من ذلك، يُمكن إضافة محلول المُحسِّن إلى محلول استخلاص الخلايا بعد استخلاص الخلايا أو الأنسجة. عند استخدام محلول استخلاص الخلايا 1X كمخفف للعينات في الاختبار، يُنصح بتركه ليصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. هام: قد يترسب محلول مُحسِّن استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (50X) المُرفق عند تخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لإذابته، يُسخَّن لفترة وجيزة عند 37 درجة مئوية مع التقليب برفق. يُمكن تخزين محلول مُحسِّن استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (50X) في درجة حرارة الغرفة لتجنب الترسيب. ملاحظة: يحتوي محلول استخلاص الخلايا 1X على مثبطات الفوسفاتاز. يجب إضافة مثبطات البروتياز إلى محلول استخلاص الخلايا 1X مباشرةً قبل تحليل الخلايا. يُمكن أيضًا إضافة مثبطات فوسفاتاز إضافية (مثل كوكتيل مثبطات البروتياز/الفوسفاتاز (100X) رقم 5872، غير مُرفق). تحضير مُستخلصات الخلايا للخلايا المُلتصقة: 1. اسحب الوسط عندما تصل كثافة المزرعة إلى 80-90%. 2. أزل الوسط واشطف الخلايا مرة واحدة بمحلول PBS 1X بارد جدًا. 3. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS) وأضف 0.5 مل من محلول استخلاص الخلايا المخفف (1X) البارد (يُوصى بإضافة مثبطات البروتياز ومثبطات الفوسفاتاز الإضافية حسب الحاجة) إلى كل طبق (قطره 10 سم) وحضّن الطبق على الجليد لمدة 5 دقائق. 4. اكشط الخلايا من الطبق وانقلها إلى أنبوب مناسب. احتفظ به على الجليد. 5. عالج المستخلصات بالموجات فوق الصوتية على الجليد. 6. قم بالطرد المركزي الدقيق لمدة 5 دقائق (14000 دورة في الدقيقة) عند 4 درجات مئوية وانقل السائل الطافي إلى أنبوب جديد. السائل الطافي هو مستخلص الخلايا. خزّنه عند -80 درجة مئوية في أجزاء للاستخدام الفردي. بالنسبة للخلايا المعلقة: 1. أزل الوسط عن طريق الطرد المركزي بسرعة منخفضة (حوالي 1200 دورة في الدقيقة) عندما يصل عدد الخلايا الحية في المزرعة إلى 0.5-1.0 × 10⁶ خلية/مل. 2. اغسل مرة واحدة بمحلول الفوسفات الملحي (1X) البارد. ٣. يمكن تحليل الخلايا المحصودة من ٥٠ مل من وسط النمو في ٢ مل من محلول استخلاص الخلايا بتركيز ١X (يُوصى بإضافة مثبطات البروتياز ومثبطات الفوسفاتاز الإضافية حسب الحاجة). ٤. تُعرَّض الخلايا المُحلَّلة للموجات فوق الصوتية على الجليد. ٥. تُفصل الخلايا بالطرد المركزي الدقيق لمدة ٥ دقائق (١٤٠٠٠ دورة في الدقيقة) عند ٤ درجات مئوية، ثم يُنقل السائل الطافي إلى أنبوب جديد. السائل الطافي هو مُستخلص الخلايا. يُحفظ في درجة حرارة -٨٠ درجة مئوية في أجزاء صغيرة للاستخدام لمرة واحدة. تخزين يُحفظ محلول مُحسِّن استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA في درجة حرارة 4 درجات مئوية، أو في درجة حرارة الغرفة. قد يترسب المحلول عند حفظه في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لإذابته، يُسخَّن لفترة وجيزة عند 37 درجة مئوية مع التقليب برفق. يُمكن حفظ محلول مُحسِّن استخلاص الخلايا FastScan™ ELISA (بتركيز 50X) في درجة حرارة الغرفة لتجنب الترسب.