مجموعة CST، 26101S، PTMScan® Glutaryl-Lysine [Glut-K]

برنامج PTMScan للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج تُحلل الخلايا في محلول منظم يحتوي على اليوريا، وتُهضم البروتينات الخلوية بواسطة إنزيمات البروتياز، ثم تُنقى الببتيدات الناتجة باستخدام استخلاص الطور الصلب ذي الطور المعكوس. بعد ذلك، تُخضع الببتيدات لتنقية المناعة باستخدام جسم مضاد PTMScan® Motif مرتبط بخرزات بروتين A أجاروز. تُزال الببتيدات غير المرتبطة بالغسل، وتُستخلص الببتيدات الحاملة لتعديلات ما بعد الترجمة (PTM) باستخدام حمض مخفف. تُجرى عملية تنقية الطور المعكوس على رؤوس دقيقة لإزالة الأملاح وفصل الببتيدات عن الجسم المضاد قبل تركيز الببتيدات المُثرية لتحليلها بتقنية LC-MS/MS. توصي شركة CST باستخدام محلول PTMScan® IAP Buffer رقم 9993 المرفق مع المجموعة. يتوفر بديل آخر، وهو محلول PTMScan® IAP Buffer Plus Detergent رقم 9992، بشكل منفصل، والذي قد يقلل من التفاعلات غير النوعية. تخزين تُزوَّد حبيبات الأجسام المضادة في محلول منظم IAP يحتوي على 50% جلسرين. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: PTMScan خلفية يخضع الليسين لمجموعة واسعة من التعديلات التنظيمية اللاحقة للترجمة نظرًا لسلسلة الأمينو الجانبية الموجبة الشحنة. ومن أبرز هذه التعديلات اليوبيكويتين والأسيتلة، وهما عمليتان محفوظتان بدرجة عالية بين بدائيات النوى وحقيقيات النوى (1، 2). يعمل نقل مجموعة الأسيل من وسائط الأيض، مثل أسيتيل-CoA، وسكسينيل-CoA، ومالونيل-CoA، وغلوتاريل-CoA، وبيوتيريل-CoA، وبروبيونيل-CoA، على معادلة الشحنة الموجبة لليسين وإحداث تغييرات بنيوية تؤثر على وظيفة البروتين الركيزة. يتم تحفيز أسيتلة الليسين بواسطة إنزيمات أسيتيل ترانسفيراز الهيستون (HATs)، باستخدام أسيتيل-CoA كعامل مساعد (3، 4). أما إزالة الأسيل فتتم بوساطة إنزيمات دي أسيتيل الهيستون (HDACs 1-11) وسيرتوينات 1-7 المعتمدة على NAD. بعض السيرتوينات ذات نشاط نازع للأسيتيل ضئيل أو معدوم، مما يشير إلى أنها أكثر ملاءمة لركائز أسيل الليسين الأخرى (5). تسود عمليات إضافة الغلوتاريل إلى الليسين في الميتوكوندريا، وتحدث بشكل رئيسي على البروتينات الأيضية. على غرار المالونيلية والساكسينيلية، يُرجح أن نقل الغلوتاريل إلى الليسين يتم بوساطة مزيج من الآليات غير الإنزيمية والديناميكية الحرارية والقياسية التي تحفز التفاعل في البيئة الحمضية للميتوكوندريا بوجود ناقلات أسيتيل متعددة الوظائف (6). تُظهر الفئران المُعدلة وراثيًا التي تفتقر إلى SirT5 ونازعة هيدروجين غلوتاريل-CoA (GCDH) مستويات مرتفعة من البروتينات المُغلوتَرة، كما هو الحال في الفئران التي تتغذى على نظام غذائي غني بالتريبتوفان. يُرجح أن يكون SirT5 هو نازع الغلوتاريل الرئيسي، كما يتضح من نشاطه على سينثاز فوسفات الكاربامويل 1 (CPS1)، وهو بروتين مُغلوتَر بكثافة في دورة اليوريا (7). أسماء بديلة غلوتاريل ليسين؛ غلوتاريليشن؛ غلوتارات الليسين