CST، 28572S، لوحة قياس التدفق الخلوي لاستجابة السيتوكينات للخلايا التائية البشرية Th1

مجموعة أدوات فحص لدراسة CD3epsilon/IFN-gamma/CD8A/CD4/TNF-alpha في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يمكن تحفيز إنتاج السيتوكينات بواسطة الخلايا التائية عن طريق تنشيط الخلايا باستخدام طرق متنوعة. تشمل هذه الطرق التحفيز عبر مستقبلات الخلايا التائية من خلال حضنها مع جسم مضاد منشط لـ CD3، مثل الجسم المضاد أحادي النسيلة الفأري المنشط لـ CD3 إبسيلون البشري (OKT3) (منخفض السموم الداخلية، خالٍ من الأزيد) رقم 92511، أو المعالجة بمزيج من PMA (فوربول-12-ميريستات-13-أسيتات) وأيونوميسين. يؤدي إضافة بريفيلدين أ ومونينسين أثناء تحفيز الخلايا إلى الحد من إفراز السيتوكينات وتسهيل الكشف عن السيتوكينات داخل الخلايا. جميع الأجسام المضادة في هذه المجموعة متوافقة مع بروتوكول نفاذية Triton™ X-100 لقياس التدفق الخلوي للأجسام المضادة المقترنة مباشرة، ويمكن استخدامها في مزيج تلوين واحد على الخلايا المثبتة والمنفذة. قبل التثبيت وحضانة الأجسام المضادة، نوصي بإضافة صبغة حيوية قابلة للتثبيت، مثل صبغة Ghost Dye Violet 510 Fixable Viability Dye رقم 59863، لتمكين تحديد الخلايا الميتة واستبعادها من التحليل. استراتيجية تحديد الخلايا لمراقبة إنتاج السيتوكينات Th1 بواسطة الخلايا التائية: في حال استخدام صبغة حيوية قابلة للتثبيت، يتم أولاً تحديد الخلايا الحية. ثم يتم تحديد الخلايا اللمفاوية بناءً على التشتت الأمامي والجانبي. لمراقبة إنتاج السيتوكينات بواسطة الخلايا التائية المساعدة، يتم تحديد الخلايا CD3+CD4+ ضمن نطاق الخلايا اللمفاوية، ثم يتم تحديد الخلايا داخل هذا النطاق التي تُظهر تفاعلاً إيجابياً مع صبغة IFN-γ و/أو TNF-α. لمراقبة إنتاج السيتوكينات بواسطة الخلايا التائية السامة، يتم تحديد الخلايا CD3+CD8+ ضمن نطاق الخلايا اللمفاوية، ثم يتم تحديد الخلايا داخل هذا النطاق التي تُظهر تفاعلاً إيجابياً مع صبغة IFN-γ و/أو TNF-α. تخزين تُزوَّد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للفأر CD3 (UCHT1) (المقترنة بـ PE)، وCD4 (RPA-T4) (المقترنة بـ violetFluor™ 450)، وCD8α (RPA-T8) (المقترنة بـ PE-Cy7®) في محلول يحتوي على 10 ملي مولار من NaH₂PO₄، و150 ملي مولار من NaCl، و0.09% من NaN₃، و0.1% من الجيلاتين، عند درجة حموضة 7.2. أما الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للأرنب TNF-α (D1G2) (المقترنة بـ Alexa Fluor® 647) وIFN-γ (D3H2) XP® (المقترنة بـ Alexa Fluor® 488) فتُزوَّد في محلول فوسفات ملحي (PBS) عند درجة حموضة 7.2، يحتوي على أقل من 0.1% من أزيد الصوديوم و2 ملغ/مل من ألبومين المصل البقري (BSA). يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لا تُقسّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. يُحفظ بعيدًا عن الضوء. لا يُجمد. جميع مكونات هذه المجموعة مستقرة وفقًا للتاريخ المطبوع على ملصق العبوة الخارجية عند تخزينها في درجة الحرارة الموصى بها. يُرجى الرجوع إلى ملصقات المنتج أو بيانات المنتج أو صفحات الويب لمعرفة تواريخ "الأفضل قبل" المحددة لكل مكون على حدة. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: قياس التدفق الخلوي (مثبت/منفذ) النوعية / الحساسية يكشف كل جسم مضاد في لوحة قياس التدفق الخلوي لاستجابة السيتوكينات للخلايا التائية البشرية Th1 عن المستويات الداخلية لبروتينه المستهدف. يتعرف الجسم المضاد أحادي النسيلة للفأر CD3 (UCHT1) (المقترن بـ PE) على CD3ε. وتشمل الأجسام المضادة أحادية النسيلة للفأر CD3 (UCHT1) (المقترن بـ PE)، وCD4 (RPA-T4) (المقترن بـ violetFluor 450)، وCD8 alpha (RPA-T8) (المقترن بـ PE-Cy7). التفاعل مع الأنواع: الإنسان المصدر / التنقية تم تنقية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. ثم تم ربط الأجسام المضادة المنقاة في ظل ظروف مثالية، مع إزالة الصبغة غير المتفاعلة من المستحضر.