CST، 30299S، ببتيدات التحكم PTMScan® سكسينيل-لايسين

مستخلصات الخلايا للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يُستخدم مع بروتوكول مجموعة PTMScan® من شركة Cell Signaling Technology بدءًا من خطوة تنقية المناعة (IAP). نظرًا لأن الكمية المثلى من ببتيدات PTMScan® Control Peptides Succinyl-Lysine لتجارب كل مستخدم تعتمد على عوامل خاصة، مثل حساسية مطياف الكتلة، يمكن للمستخدمين تخفيف هذه الببتيدات حسب الحاجة. 1. قسّم ببتيدات PTMScan® Control Peptides Succinyl-Lysine إلى حصص صغيرة للتخزين كوحدات للاستخدام الفردي عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو استخدمها مباشرةً. 2. أعد تعليق ببتيدات العينة في المحلول المنظم والحجم المناسبين، على سبيل المثال، 1.4 مل من محلول PTMScan® IAP المنظم (1X). 3. صفِّ ببتيدات العينة بالطرد المركزي. 4. انقل ببتيدات العينة المصفاة إلى أنابيب تحتوي على خرز IAP. ٥. أضف ١٠ ميكرولتر من محلول PTMScan® Control Peptides Succinyl-Lysine إلى خرز IAP والببتيدات المأخوذة، واخلط جيدًا. ٦. تابع إجراءات PTMScan® أو PTMScan® HS بعد ساعتين من الحضانة. ٧. اكشف عن PTMScan® Control Peptides Succinyl-Lysine في ملف بيانات LCMS. تخزين هذا المنتج مستقر لمدة 24 شهرًا عند تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يُنصح بتقسيمه إلى حصص صغيرة لتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. خلفية يخضع الليسين لمجموعة واسعة من التعديلات التنظيمية اللاحقة للترجمة نظرًا لسلسلة الأمينو الجانبية الموجبة الشحنة. ومن أبرز هذه التعديلات اليوبيكويتين والأسيتلة، وهما عمليتان محفوظتان بدرجة عالية بين بدائيات النوى وحقيقيات النوى (1، 2). يعمل نقل مجموعة الأسيل من وسائط الأيض، مثل أسيتيل-CoA، وسكسينيل-CoA، ومالونيل-CoA، وغلوتاريل-CoA، وبيوتيريل-CoA، وبروبيونيل-CoA، على معادلة الشحنة الموجبة لليسين وإحداث تغييرات بنيوية تؤثر على وظيفة البروتين الركيزة. يتم تحفيز أسيتلة الليسين بواسطة إنزيمات أسيتيل ترانسفيراز الهيستون (HATs)، باستخدام أسيتيل-CoA كعامل مساعد (3، 4). أما إزالة الأسيل فتتم بوساطة إنزيمات دي أسيتيل الهيستون (HDACs 1-11) وسيرتوينات 1-7 المعتمدة على NAD. بعض السيرتوينات ذات نشاط نازع للأسيتيل ضئيل أو معدوم، مما يشير إلى أنها أكثر ملاءمة لركائز أسيل ليسين أخرى (5). يُعد Sirt5 إنزيمًا نازعًا للسكسينيل والمالونيل في الميتوكوندريا بشكل أساسي (5، 6). في غياب ناقل السكسينيل المعروف، يُرجح أن يكون السكسينيل مدفوعًا بتركيز سكسينيل-CoA ودرجة الحموضة داخل الخلايا، ويخضع لتقلبات أيضية (7، 8). ينتشر سكسينيل البروتين بشكل خاص بين بروتينات الأيض الميتوكوندرية والبكتيريا، مما يعزز الصلة التطورية بين الميتوكوندريا والكائنات بدائية النواة. غالبًا ما يحدث عند بقايا الليسين التي تخضع للأستلة أو اليوبيكويتين بشكل بديل. تم تحديد أكثر من ألف موقع لسكسنلة الليسين على مئات البروتينات، بما في ذلك نازعة هيدروجين الجلوتامات (15 موقعًا)، ونازعة هيدروجين الماليت، وسينثاز السترات، وسينثاز فوسفات الكاربامويل 1، وبروتينات الهيستون (9).