مستخلصات خلايا التحكم MCF7 من نوع CST، 34499S، p70 S6 Kinase

مجموعة استخلاص الخلايا لدراسة p70S6K1 في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يُغلى لمدة 3 دقائق قبل الاستخدام. يُحمّل 10 ميكرولتر من مستخلصات خلايا التحكم MCF7 p70 S6 Kinase المفسفرة وغير المفسفرة في كل حارة. تخزين يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. مُزوّد ​​في محلول عازل لعينة SDS: 62.5 ملي مولار Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 6.8 عند 25 درجة مئوية)، 2% وزن/حجم SDS، 10% جلسرين، 50 ملي مولار DTT، 0.01% وزن/حجم أزرق بروموفينول أو أحمر فينول خلفية إنزيم p70 S6 kinase هو كيناز بروتين سيرين/ثريونين مُنشَّط بالميتوجين، وهو ضروري لنمو الخلايا وتقدم دورة الخلية في المرحلة G1 (1، 2). يقوم هذا الإنزيم بفسفرة بروتين S6 في الوحدة الفرعية 40S للريبوسوم، ويشارك في تنظيم ترجمة mRNAs ذات تسلسل أوليغوبيريميدين في الطرف 5' (1). يوجد نظير آخر، هو p85 S6 kinase، مشتق من نفس الجين، وهو مطابق لـ p70 S6 kinase باستثناء 23 حمضًا أمينيًا إضافيًا في الطرف الأميني، والتي تُشفِّر إشارة توجيه نووي (1). يقع كلا النظيرين على مسار إشارات مُنشَّط بالميتوجين، يقع أسفل كيناز فوسفاتيديل إينوزيتول-3 (PI-3K) وهدف الراباميسين، FRAP/mTOR، وهو مسار يختلف عن سلسلة Ras/MAP kinase (1). تُضبط فعالية كيناز p70 S6 من خلال عدة عمليات فسفرة تقع ضمن نطاقات التحفيز والربط والركيزة الزائفة (1). تُعد فسفرة الثريونين 229 في نطاق التحفيز والثريونين 389 في نطاق الربط بالغة الأهمية لوظيفة الكيناز (1). ومع ذلك، فإن فسفرة الثريونين 389 هي الأكثر ارتباطًا بفعالية كيناز p70 (3). وتُعد الفسفرة المسبقة للثريونين 389 ضرورية لعمل كيناز البروتين 1 المعتمد على الفوسفاتيديل إينوزيتول 3 (PDK1) على الثريونين 229 (4، 5). ويُحفز فسفرة هذا الموقع بواسطة عوامل النمو مثل الأنسولين وعامل نمو البشرة (EGF) وعامل نمو الخلايا الليفية (FGF)، بالإضافة إلى مصل الدم وبعض روابط مستقبلات البروتين G المقترنة، ويُثبط بواسطة وورتمنين، وLY294002 (مثبط PI-3K)، وراباميسين (مثبط FRAP/mTOR) (1، 6، 7). تقع الأحماض الأمينية Ser411 وThr421 وSer424 ضمن منطقة غنية بالسيرين والبرولين في منطقة الركيزة الزائفة (1). يُعتقد أن الفسفرة في هذه المواقع تُنشّط كيناز p70 S6 عبر إزالة تثبيط الركيزة الزائفة (1، 2). يُعد موقع الفسفرة Ser371، وهو موقع آخر حساس لـ LY294002 والراباميسين، ركيزة لـ mTOR، ويرتبط ارتباطًا وثيقًا بنشاط كيناز p70 S6 الطافر المقاوم جزئيًا للراباميسين (8). أسماء بديلة مستخلص؛ محلول خلوي؛ p70-s6k؛ p70s6؛ s6k؛ كيناز s6