CST، 40061S، ببتيدات التحكم PTMScan® أحادي ميثيل أرجينين

مستخلصات الخلايا للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يُستخدم مع بروتوكول مجموعة PTMScan® من شركة Cell Signaling Technology بدءًا من خطوة تنقية المناعة (IAP). نظرًا لأن الكمية المثلى من ببتيدات التحكم أحادية ميثيل أرجينين PTMScan® لتجارب كل مستخدم تعتمد على عوامل خاصة، مثل حساسية مطياف الكتلة، يمكن للمستخدمين تخفيف هذه الببتيدات حسب الحاجة. 1. قسّم ببتيدات التحكم أحادية ميثيل أرجينين PTMScan® إلى حصص صغيرة للتخزين كوحدات للاستخدام الفردي عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو استخدمها فورًا. 2. أعد تعليق ببتيدات العينة في المحلول المنظم والحجم المناسبين، على سبيل المثال، 1.4 مل من محلول PTMScan® IAP المنظم (1X). 3. صفِّ ببتيدات العينة بالطرد المركزي. 4. انقل ببتيدات العينة المصفاة إلى أنابيب تحتوي على خرز IAP. ٥. أضف ١٠ ميكرولتر من محلول PTMScan® Control Peptides Mono-Methyl Arginine إلى خرز IAP وعينات الببتيدات، واخلط جيدًا. ٦. تابع إجراءات PTMScan® أو PTMScan® HS عند خطوة الحضانة لمدة ساعتين. ٧. اكشف عن محلول PTMScan® Control Peptides Mono-Methyl Arginine في ملف بيانات LCMS. تخزين هذا المنتج مستقر لمدة 24 شهرًا عند تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يُنصح بتقسيمه إلى حصص صغيرة لتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. خلفية يُعدّ مثيلة الأرجينين تعديلًا شائعًا بعد الترجمة، ويوجد على البروتينات النووية والسيتوبلازمية. وتشارك البروتينات المُثيلة بالأرجينين في العديد من العمليات الخلوية المختلفة، بما في ذلك تنظيم النسخ، ونقل الإشارات، واستقلاب الحمض النووي الريبوزي (RNA)، وإصلاح تلف الحمض النووي (DNA) (1-3). تتم مثيلة الأرجينين بواسطة عائلة إنزيمات ناقلة ميثيل الأرجينين (PRMT) التي تحفز نقل مجموعة ميثيل من S-أدينوسيل ميثيونين (AdoMet) إلى ذرة نيتروجين الغوانيدين في الأرجينين (4). وهناك ثلاثة أنواع مختلفة من مثيلة الأرجينين: ثنائي ميثيل الأرجينين غير المتماثل (aDMA، أوميغا-NG،NG-ثنائي ميثيل الأرجينين)، حيث تُوضع مجموعتا ميثيل على إحدى ذرات النيتروجين الطرفية لمجموعة الغوانيدين في الأرجينين؛ وثنائي ميثيل الأرجينين المتماثل (sDMA، أوميغا-NG،NG-ثنائي ميثيل الأرجينين)، حيث تُوضع مجموعة ميثيل واحدة على كل من ذرتي نيتروجين الغوانيدين الطرفيتين في الأرجينين؛ وميثيل أرجينين أحادي الميثيل (MMA، أوميغا-NG-ميثيل أرجينين)، حيث تُضاف مجموعة ميثيل واحدة إلى إحدى ذرات النيتروجين الطرفية للأرجينين. ولكل من هذه التعديلات عواقب وظيفية مختلفة محتملة. على الرغم من أن جميع بروتينات PRMT تحفز تكوين MMA، فإن بروتينات PRMT من النوع الأول (PRMT1، 3، 4، 6، و8) تضيف مجموعة ميثيل إضافية لإنتاج aDMA، بينما تنتج بروتينات PRMT من النوع الثاني (PRMT5 و7) sDMA. غالبًا ما توجد بقايا الأرجينين الميثيلية في نطاقات بروتينية غنية بالجليسين-أرجينين (GAR)، مثل تكرارات RGG وRG وRXR (5). ومع ذلك، يقوم كل من PRMT4/CARM1 وPRMT5 بميثلة بقايا الأرجينين داخل وحدات غنية بالبرولين-جليسين-ميثيونين (PGM) (6).