مستخلصات خلايا التحكم في تلف الحمض النووي CST، 4768S

مجموعة استخلاص الخلايا للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يُغلى لمدة 3 دقائق قبل الاستخدام. يُحمّل 10 ميكرولتر من مستخلصات خلايا التحكم في تلف الحمض النووي المفسفرة وغير المفسفرة في كل حارة. تخزين يُقدّم في محلول عازل لعينة SDS: 62.5 ملي مولار من Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 6.8 عند 25 درجة مئوية)، 2% وزن/حجم من SDS، 10% جلسرين، 50 ملي مولار من DTT، 0.01% وزن/حجم من أزرق بروموفينول أو أحمر فينول. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية، أو في درجة حرارة -80 درجة مئوية للتخزين طويل الأمد. خلفية تُعدّ كينازات ATM (المتحولة في رنح توسع الشعيرات) وATR (المرتبطة بـ ATM وRad3) من عائلة كينازات PI3K (PIKK) التي تُفسفر ركائز متعددة على بقايا السيرين أو الثريونين التي تليها الغلوتامين استجابةً لتلف الحمض النووي أو توقف التضاعف (1-3). يُفسفر بروتين p53 بواسطة ATM وATR وDNA-PK عند Ser15. يُضعف هذا الفسفرة قدرة MDM2 على الارتباط بـ p53، مما يُعزز تراكمه وتفعيله استجابةً لتلف الحمض النووي (4، 5). يلعب كل من Chk1 وChk2، وهما كينازات بروتينية تابعة لـ ATM/ATR، دورًا هامًا في التحكم في نقاط التفتيش الخاصة بتلف الحمض النووي، والتطور الجنيني، وكبح الأورام (6). يُفسفر Chk1 عند Ser280 وSer296 بعد تلف الحمض النووي. يحتوي النطاق الأميني الطرفي لبروتين Chk2 على سلسلة من سبعة بقايا سيرين أو ثريونين، بما في ذلك Thr68، يتبع كل منها غلوتامين (نمط SQ أو TQ). بعد تلف الحمض النووي (DNA) بفعل الإشعاع المؤين (IR) أو الأشعة فوق البنفسجية (UV) أو المعالجة بالهيدروكسي يوريا، يتم فسفرة Thr68 ومواقع أخرى في هذه المنطقة بواسطة ATM/ATR (7-9). غالبًا ما تتعرض بروتينات BRCA1 وBRCA2، المسؤولة عن قابلية الإصابة بسرطان الثدي، لطفرات في حالات سرطان الثدي والمبيض الوراثي، ولها أدوار في عمليات متعددة تتعلق بتلف الحمض النووي وإصلاحه، وتقدم دورة الخلية، والنسخ، واليوبيكويتين، والاستماتة الخلوية. تم تحديد العديد من مواقع الفسفرة الناتجة عن تلف الحمض النووي على BRCA1، بما في ذلك سيرين 1524، كما يمكن للكينازات التي يتم تنشيطها بطريقة تعتمد على دورة الخلية، بما في ذلك Aurora A وCDK2، أن تفسفر BRCA1. يؤدي التعرض للأشعة تحت الحمراء، وتلف الحمض النووي، وتلف الحمض النووي الناتج عن الإشعاع، إلى فسفرة سريعة لبروتين الهيستون H2A.X، أحد أفراد عائلة الهيستون H2A، عند الموقع Ser139 بواسطة ATM (10، 11). في غضون دقائق من تلف الحمض النووي، يتمركز بروتين H2A.X المفسفر عند الموقع Ser139 في مواقع تلف الحمض النووي في بؤر تحت نووية (12). أسماء بديلة تلف الحمض النووي؛ مستخلص؛ محلول متحلل