CST، 48105S، مصد إيقاف CUT&RUN 4X

مساحة احتياطية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج لإجراء اختبار CUT&RUN، نوصي بإضافة 37.5 ميكرولتر من محلول إيقاف CUT&RUN 4X، و3.75 ميكرولتر من محلول الديجيتونين رقم 16359، و0.75 ميكرولتر من إنزيم RNAse A (بتركيز 10 ملغم/مل) رقم 7013 إلى 108 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز (150 ميكرولتر لكل تفاعل) مباشرةً قبل الاستخدام. ثم حضّن العينة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. يمكن إضافة كمية مناسبة من الحمض النووي المرجعي (Spike-In DNA) إلى محلول إيقاف CUT&RUN 4X، إذا رغبت في ذلك. تخزين يُحفظ مُخفف الإيقاف CUT&RUN 4X عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. هذا المنتج صالح للاستخدام لمدة 12 شهرًا على الأقل. خلفية على غرار اختبار الترسيب المناعي للكروماتين (ChIP)، يُعدّ اختبار القطع تحت الأهداف والإطلاق باستخدام النيوكلياز (CUT&RUN) تقنيةً فعّالةً ومتعددة الاستخدامات لدراسة تفاعلات البروتين مع الحمض النووي ضمن سياق الكروماتين الطبيعي للخلية (1-4). يوفر اختبار CUT&RUN طريقةً سريعةً ودقيقةً وفعّالةً للكشف عن تفاعلات البروتين مع الحمض النووي في الخلية، حتى مع عدد قليل من الخلايا. على عكس اختبار ChIP، لا يتطلب اختبار CUT&RUN الربط المتبادل بالفورمالديهايد، ولا تجزئة الكروماتين، ولا الترسيب المناعي، مما يجعله طريقةً أسرع وأكثر كفاءةً لإثراء تفاعلات البروتين مع الحمض النووي وتحديد الجينات المستهدفة. يمكن إجراء اختبار CUT&RUN في أقل من يوم واحد، بدءًا من الخلايا الحية وصولًا إلى الحمض النووي النقي، وقد ثبتت فعاليته مع عدد قليل من الخلايا يتراوح بين 500 و1000 خلية لكل اختبار (1،2). بدلاً من تفتيت الكروماتين الخلوي بالكامل كما هو الحال في تقنية ChIP، تستخدم تقنية CUT&RUN هضم الكروماتين الموجه بالأجسام المضادة، مما ينتج عنه إشارة خلفية أقل بكثير من تلك الموجودة في اختبار ChIP. ونتيجة لذلك، تتطلب تقنية CUT&RUN عُشر عمق التسلسل المطلوب لاختبارات ChIP-seq فقط (1،2). وأخيرًا، يسمح تضمين الحمض النووي المُضاف كعنصر تحكم بسيط بالقياس الكمي الدقيق وتطبيع ارتباط البروتين المستهدف، وهو أمر غير ممكن باستخدام طريقة ChIP. وهذا يوفر تطبيعًا فعالًا للإشارة بين العينات وبين التجارب. أسماء بديلة C&R؛ CnR؛ CUT & RUN؛ cut and run؛ CUT and Run؛ CUT&RUN؛ cutandrun؛ CUTandRUN؛ تعديل الهيستون