CST، 56795S، مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي لأنظمة Illumina (ChIP-seq، CUT&RUN)

مجموعة أدوات ChIP للدراسة في مجال البحث. تخزين يُحفظ جميع المكونات في درجة حرارة -20 درجة مئوية. هذا المنتج صالح للاستخدام لمدة 12 شهرًا في حال تخزينه بشكل صحيح. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: تسلسل الحمض النووي للكروماتين بتقنية IP، وتقنية CUT&RUN النوعية / الحساسية تم التحقق من صحة هذه المجموعة بالاشتراك مع Multiplex Oligos لأنظمة Illumina (بادئات فهرسة مفردة) (ChIP-seq، CUT&RUN) #29580 أو Multiplex Oligos لأنظمة Illumina (بادئات فهرسة مزدوجة) (ChIP-seq، CUT&RUN) #47538 لإنشاء مكتبات DNA مؤهلة باستخدام ما لا يقل عن 0.5 نانوغرام من ChIP DNA أو ما لا يقل عن 0.1 نانوغرام من CUT&RUN DNA كمواد أولية. التفاعل مع الأنواع: من المتوقع أن يتفاعل مع جميع الأنواع خلفية يُعدّ اختبار الترسيب المناعي للكروماتين (ChIP) تقنيةً فعّالةً ومتعددة الاستخدامات لدراسة تفاعلات البروتين مع الحمض النووي (DNA) ضمن سياق الكروماتين الطبيعي للخلية (1، 2). يُمكن استخدام هذا الاختبار لتحديد العديد من البروتينات المرتبطة بمنطقة مُحددة من الجينوم، أو على العكس، لتحديد العديد من مناطق الجينوم التي يرتبط بها بروتين مُعين (3-6). كما يُمكن استخدامه لتحديد الترتيب المُحدد لاستقطاب البروتينات المختلفة إلى مُحفز الجين، أو لقياس الكمية النسبية لتعديل هيستون مُعين عبر موقع جيني كامل (3، 4). بالإضافة إلى بروتينات الهيستون، يُمكن استخدام اختبار ChIP لتحليل ارتباط عوامل النسخ والعوامل المُساعدة، وعوامل تضاعف الحمض النووي، وبروتينات إصلاح الحمض النووي. عند إجراء اختبار ChIP، تُثبّت الخلايا أو الأنسجة أولاً بالفورمالديهايد، وهو عامل ربط مُتبادل قابل للعكس بين البروتين والحمض النووي، والذي يحافظ على تفاعلات البروتين مع الحمض النووي التي تحدث في الخلية (1، 2). تُحلل الخلايا ويُستخلص الكروماتين ويُجزأ باستخدام الموجات فوق الصوتية أو الهضم الأنزيمي. ثم يُخضع الكروماتين لعملية ترسيب مناعي باستخدام أجسام مضادة نوعية لبروتين معين أو تعديل هيستوني محدد. أي تسلسلات DNA مرتبطة بالبروتين أو التعديل الهيستوني محل الاهتمام ستترسب مع الكروماتين كجزء من المركب الكروماتيني المتشابك، وستزداد الكمية النسبية لهذا التسلسل DNA من خلال عملية الانتقاء المناعي. بعد الترسيب المناعي، تُفك روابط البروتين-DNA المتشابكة ويُنقى الحمض النووي. يمكن استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل القياسي (PCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qPCR) لقياس مقدار زيادة تسلسل DNA معين بواسطة الترسيب المناعي النوعي للبروتين (1، 2). بدلاً من ذلك، يمكن دمج فحص ChIP مع تقنيات المصفوفات الدقيقة لتقسيم الجينوم (ChIP على رقاقة)، ​​أو التسلسل عالي الإنتاجية، أو استراتيجيات الاستنساخ، وكلها تسمح بتحليل شامل للجينوم لتفاعلات البروتين-DNA وتعديلات الهيستون (5-8). أسماء بديلة الباركود؛ ChIP؛ مجموعة ChIP؛ ChIP-seq؛ تسلسل ChIP؛ ترسيب الكروماتين المناعي؛ ترسيب الكروماتين المناعي؛ CnR؛ CUT & RUN؛ مكتبة الحمض النووي؛ بناء مكتبة الحمض النووي؛ تحضير مكتبة الحمض النووي؛ تسلسل الجيل التالي؛ تسلسل NG؛ التسلسل