CST، 60395S، لوحة قياس التدفق الخلوي لعلامات الخلايا التائية CD8+ المستنفدة من الخلايا السلفية للفأر

مجموعة أدوات فحص لدراسة فئران PDCD1 / TCF7 / Granzyme B / CD3epsilon / CD3G / CD8A في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج جميع الأجسام المضادة في هذه المجموعة متوافقة مع مجموعة قياس التدفق الخلوي داخل الخلايا (Triton X-100) رقم 51995، ويمكن استخدامها في مزيج تلوين واحد على الخلايا المثبتة والمنفذة. قبل التثبيت وحضانة الأجسام المضادة، نوصي بإضافة صبغة حيوية قابلة للتثبيت، مثل صبغة Ghost Dye Violet 510 Fixable Viability Dye، لتمكين تحديد الخلايا الميتة واستبعادها من التحليل. يمكن دمج هذه المجموعة مع تلوين رباعي الببتيد-MHC لتحديد الخلايا النوعية للمستضد. غالبًا ما يُجرى تلوين الرباعي على الخلايا الحية. إذا رُغِبَ في تلوين الرباعي، نوصي بمقارنة نشاط الكاشف في تلوين الخلايا الحية مقابل البروتوكول الموصى به للمجموعة. إذا لم يكن هناك فرق كبير بين الحالتين، يمكن تضمين الرباعي في مزيج تلوين مجموعة الأجسام المضادة. في حال وجود فقدان كبير في النشاط بعد التثبيت والنفاذية، يجب إجراء تلوين الرباعي على الخلايا الحية قبل التثبيت والنفاذية. استراتيجية تحديد الخلايا لمراقبة الخلايا التائية CD8+ المستنفدة: في حال استخدام صبغة حيوية قابلة للتثبيت، يتم أولاً تحديد الخلايا الحية. ثم يتم تحديد الخلايا اللمفاوية بناءً على التشتت الأمامي والجانبي. الخلايا التائية السامة هي خلايا CD3+CD8+ ضمن نطاق الخلايا اللمفاوية. بعد ذلك، يتم مراقبة تعبير TCF1 وPD-1 على الخلايا التائية السامة. الخلايا التائية السامة التي تحمل TCF1+PD-1+ هي خلايا سلفية مستنفدة، ومن المتوقع أن تكون سلبية في الغالب لتعبير Granzyme B. أما الخلايا التائية السامة التي لا تحمل TCF1+PD-1+ فهي خلايا متمايزة ذات قدرة فعالة، ومن المتوقع أن تكون إيجابية في الغالب لتعبير Granzyme B. تخزين يتم توفير PD-1 (النطاق داخل الخلوي) (D7D5W) XP ® Rabbit mAb (Alexa Fluor ® 488 Conjugate)، وTCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjugate)، وGranzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor ® 647 Conjugate) في محلول PBS (pH 7.2)، مع أقل من 0.1% أزيد الصوديوم و2 ملغم/مل BSA. يُزوَّد كلٌّ من الجسم المضاد أحادي النسيلة للفئران CD8α (2.43) (المقترن بـ PE-Cy7®) والجسم المضاد أحادي النسيلة للفئران CD3 (17A2) (المقترن بـ violetFluor™ 450) في محلول يحتوي على 10 ملي مولار من NaH₂PO₄، و150 ملي مولار من NaCl، و0.09% من NaN₃، و0.1% من الجيلاتين، عند درجة حموضة 7.2. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. يُحفظ بعيدًا عن الضوء. لا يُجمَّد. جميع مكونات هذه المجموعة مستقرة وفقًا لتاريخ الصلاحية المطبوع على ملصق العبوة الخارجية عند تخزينها في درجة الحرارة الموصى بها. يُرجى الرجوع إلى ملصقات المنتج أو بيانات المنتج أو صفحات الويب لمعرفة تواريخ "الأفضل قبل" الخاصة بكل مكون على حدة. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: قياس التدفق الخلوي (مثبت/منفذ) النوعية / الحساسية يكشف كل جسم مضاد في لوحة قياس التدفق الخلوي لعلامات الخلايا التائية CD8+ المستنفدة من الخلايا السلفية للفأر عن المستويات الداخلية لبروتينه المستهدف. الجسم المضاد أحادي النسيلة للفئران CD8 ألفا (2.43) (PE-Cy7) التفاعل مع الأنواع: الفأر المصدر / التنقية تم تنقية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. ثم تم ربط الأجسام المضادة المنقاة في ظل ظروف مثالية، مع إزالة الصبغة غير المتفاعلة من المستحضر.