CST، 61231T، جسم مضاد أحادي النسيلة من الأرانب، فوسفو-ب-راف (سير365) (F6P2S)

جسم مضاد أحادي النسيلة لدراسة فوسفات B-Raf (Ser365). مُعتمد للاستخدام في تقنيات Western Blotting وSimple Western™ والترسيب المناعي. متوفر بحجمين. يتميز الجسم المضاد أحادي النسيلة Phospho-B-Raf (Ser365) (F6P2S) المُستخلص من الأرانب (CST #61231) بدقة عالية وخضع لاختبارات داخلية صارمة، وهو جاهز للشحن. معلومات استخدام المنتج اللطخة الغربية: 1:1000 Simple Western™: 1:10 - 1:50 الترسيب المناعي: 1:50 تخزين يُزوَّد هذا المنتج في محلول يحتوي على 10 ملي مولار من هيبس الصوديوم (الأس الهيدروجيني 7.5)، و150 ملي مولار من كلوريد الصوديوم، و100 ميكروغرام/مل من ألبومين المصل البقري، و50% جلسرين، وأقل من 0.02% أزيد الصوديوم. يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية. لا تُقسِّم الأجسام المضادة إلى أجزاء. بروتوكول البروتوكولات المتاحة: لطخة ويسترن، الترسيب المناعي النوعية / الحساسية يتعرف الجسم المضاد أحادي النسيلة للأرانب Phospho-B-Raf (Ser365) (F6P2S) على المستويات الطبيعية لبروتين B-Raf فقط عند فسفرته عند الموقع Ser365. لا يتفاعل هذا الجسم المضاد مع B-Raf المفسفر عند المواقع Ser363 أو Ser364 أو Ser446، أو مع c-Raf المفسفر عند الموقع Ser259. يكشف هذا الجسم المضاد عن بروتين بوزن 70 كيلو دالتون غير معروف الهوية في بعض سلالات الخلايا. التفاعل مع الأنواع: الإنسان، الفأر، الجرذ المصدر / التنقية يتم إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق تحصين الحيوانات بببتيد فوسفوري اصطناعي يتوافق مع البقايا المحيطة بـ Ser365 من بروتين B-Raf البشري. خلفية تُعدّ A-Raf وB-Raf وc-Raf (Raf-1) المؤثرات الرئيسية التي يستقطبها Ras المرتبط بـ GTP لتنشيط مسار MEK-MAP kinase (1). يُعدّ تنشيط c-Raf الأكثر فهمًا، ويتضمن فسفرة في مواقع تنشيط متعددة، بما في ذلك Ser338 وTyr341 وThr491 وSer494 وSer497 وSer499 (2). وقد ثبت أن كيناز p21 المنشط (PAK) يُفسفر c-Raf عند Ser338، كما تُفسفر عائلة Src عند Tyr341 لتحفيز نشاط c-Raf (3، 4). يُقابل Ser338 في c-Raf مواقع مماثلة في A-Raf (Ser299) وB-Raf (Ser446)، على الرغم من أن هذا الموقع مُفسفر بشكل دائم في B-Raf (5). يمكن فسفرة مواقع ارتباط البروتين المثبط 14-3-3 على c-Raf (Ser259 وSer621) بواسطة Akt وAMPK على التوالي (6،7). على الرغم من تشابه A-Raf وB-Raf وc-Raf في التسلسل والوظيفة، فقد لوحظ تنظيم تفاضلي بينها (8). ومن المثير للاهتمام أن B-Raf يحتوي على ثلاثة مواقع فسفرة توافقية لـ Akt (Ser365 وSer429 وThr440) ويفتقر إلى موقع مكافئ لـ Tyr341 في c-Raf (8،9). أظهرت الدراسات البحثية أن طفرة V600E في B-Raf تؤدي إلى زيادة نشاط الكيناز، وهي شائعة في الورم الميلانيني الخبيث (10). ستة بقايا من c-Raf (Ser29 وSer43 وSer289 وSer296 وSer301 وSer642) تصبح مفرطة الفسفرة بطريقة تتوافق مع تعطيل c-Raf. يعتمد فرط فسفرة هذه المواقع الستة على إشارات MEK اللاحقة، مما يجعل c-Raf غير مستجيب لأحداث التنشيط اللاحقة (11). تُثبّط فسفرة B-Raf عند Ser365 بواسطة بروتين كيناز A مسار إشارات RAS-RAF-MEK-ERK، على غرار فسفرة c-Raf عند Ser259 (12، 13). يُنشئ تحفيز فورسكولين لفسفرة B-Raf عند Ser365 موقع ارتباط لبروتينات 14-3-3 التنظيمية، مما يمنع ارتباط NRas بـ B-Raf تنافسيًا، وبالتالي يثبط تنشيط MEK وERK اللاحق (12). يمكن تعطيل موقع ارتباط 14-3-3 في المختبر عن طريق استبدال Ser365 بالألانين (12، 13). أدى إدخال طفرة Ser365Ala إلى خطوط خلايا B-Raf V600E إلى تعزيز التماثل الذاتي لـ B-Raf، مما أدى إلى انخفاض الحساسية لمثبط Raf PLX4720، وتنشيط MEK/ERK لفترة طويلة، واستمرار التكاثر (13). أسماء بديلة بروتين B-raf بوزن 94 كيلو دالتون؛ B-raf؛ بروتين كيناز سيرين/ثريونين لبروتين B-Raf الأولي المسرطن (p94)؛ بروتين كيناز سيرين/ثريونين لبروتين B-Raf الأولي المسرطن؛ بروتين سيرين/ثريونين لبروتين B-Raf؛ B-RAF1؛ BRAF؛ BRAF1؛ FLJ95109؛ MGC126806؛ MGC138284؛ نظير جين الورم الفيروسي لسرطان الفئران (v-raf) B1؛ NS7؛ p94؛ بروتين B-Raf الأولي المسرطن؛ RAFB1؛ بروتين كيناز سيرين/ثريونين لبروتين B-raf؛ نظير جين الورم الفيروسي لسرطان الفئران v-raf B؛ نظير جين الورم الفيروسي لسرطان الفئران v-Raf B1 مواصفة التفاعل: HMR الحساسية: داخلية المنشأ الوزن الجزيئي (كيلودالتون): 86-96 المصدر/النمط المصلي: IgG الأرنب