CST، 6292S، SignalSilence® PLK1 siRNA I

استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) لدراسة PLK1 في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج توصي شركة CST بإجراء عملية نقل الجينات باستخدام 100 نانومتر من SignalSilence® PLK1 siRNA I قبل 48 إلى 72 ساعة من تحلل الخلايا. لإجراء عملية نقل الجينات، اتبع البروتوكول المقدم من الشركة المصنعة لكاشف نقل الجينات. لا تتردد في الاتصال بشركة CST لأي استفسارات حول الاستخدام. تحتوي كل قارورة على ما يعادل 100 عملية نقل جينات، وهو ما يتوافق مع تركيز نهائي لـ siRNA يبلغ 100 نانومتر لكل عملية نقل جينات في صفيحة ذات 24 بئراً بحجم إجمالي 300 ميكرولتر لكل بئر. تخزين يُزوَّد منتج SignalSilence® siRNA في ماء خالٍ من إنزيم RNase. قسّم المنتج إلى حصص صغيرة وخزّنها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية توجد أربعة أنواع على الأقل من الكينازات الشبيهة بـ Polo في خلايا الثدييات: PLK1 وPLK2 وPLK3 وPLK4/SAK (1). يبدو أن PLK1 يؤدي أدوارًا متعددة أثناء الانقسام الخلوي، لا سيما في تنظيم بدء الانقسام والخروج منه. يتم تنشيط عامل تحفيز الانقسام (MPF)، cdc2/cyclin B1، عن طريق إزالة الفسفرة من cdc2 (Thr14/Tyr15) بواسطة cdc25C. يقوم PLK1 بفسفرة cdc25C عند Ser198 وcyclin B1 عند Ser133، مما يؤدي إلى انتقال هذه البروتينات من السيتوبلازم إلى النواة (2-5). وقد اقتُرح أن فسفرة PLK1 لـ Myt1 عند Ser426 وThr495 تُعطّل Myt1، وهو أحد الكينازات المعروفة بفسفرة cdc2 عند Thr14/Tyr15 (6). تقوم كينازات شبيهة بـ Polo أيضًا بفسفرة الوحدة الفرعية SCC1 من الكوهيسين، مما يؤدي إلى إزاحة الكوهيسين من أذرع الكروموسومات، وهو ما يسمح بتمركزه الصحيح في السنتروميرات (7). يتطلب الخروج من الانقسام المتساوي تنشيط مُركَّب تعزيز الطور الانفصالي (APC) (8)، وهو إنزيم ليغاز اليوبيكويتين المسؤول عن إزالة الكوهيسين من السنتروميرات، وتحلل السيكورين، والسيكلين A، والسيكلين B1، والأورورا A، وcdc20 (9). وقد ثبتت فسفرة PLK1 للوحدات الفرعية APC، وهي Apc1 وcdc16 وcdc27، واقتُرح أنها آلية لتنظيم الخروج من الانقسام المتساوي (10، 11). أُفيد أن استبدال Thr210 بـ Asp يزيد من نشاط كيناز PLK1 ويؤخر/يوقف الخلايا في الانقسام المتساوي، بينما يؤدي استبدال Ser137 بـ Asp إلى توقف الخلية في الطور S (12). بالإضافة إلى ذلك، في حين وُجد أن تلف الحمض النووي يثبط نشاط كيناز PLK1، فإن الطفرة Thr210Asp مقاومة لهذا التثبيط (13). وقد أُفيد أن PLK1 يُفسفر عند Ser137 وThr210 في الانقسام المتساوي؛ ويمنع تلف الحمض النووي الفسفرة في هذه المواقع (14). مواصفة التفاعل: H