CST، 6406S، SignalSilence® PKA C-alpha siRNA I

استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) لدراسة PKA C-alpha في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج توصي شركة CST بإجراء عملية نقل الجينات باستخدام 100 نانومتر من SignalSilence® PKA C-alpha siRNA I قبل 48 ساعة من تحلل الخلايا. لإجراء عملية نقل الجينات، اتبع البروتوكول المقدم من الشركة المصنعة لكاشف نقل الجينات. لا تتردد في الاتصال بشركة CST لأي استفسارات حول الاستخدام. تخزين يُزوَّد منتج SignalSilence® siRNA في ماء خالٍ من إنزيم RNase. قسّم المنتج إلى حصص صغيرة وخزّنها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية ينشط الرسول الثاني، أحادي فوسفات الأدينوزين الحلقي (cAMP)، بروتين كيناز المعتمد على cAMP (PKA أو cAPK) في خلايا الثدييات، ويتحكم في العديد من الآليات الخلوية، مثل نسخ الجينات، ونقل الأيونات، وفسفرة البروتينات (1). يتكون PKA غير النشط من أربع وحدات فرعية غير متجانسة، تتألف من ثنائي وحدة تنظيمية (R) وثنائي وحدة تحفيزية (C). في هذه الحالة غير النشطة، تحجب تسلسلات الركيزة الزائفة على الوحدات الفرعية R المواقع النشطة على الوحدات الفرعية C. تم تحديد ثلاثة أشكال متماثلة من الوحدة الفرعية C (C-α، C-β، وC-γ) وعائلتين من الوحدات الفرعية التنظيمية (RI وRII) ذات خصائص ارتباط مميزة بـ cAMP. توجد عائلتا R في شكلين متماثلين، α وβ (RI-α، RI-β، RII-α، وRII-β). عند ارتباط cAMP بالوحدات الفرعية R، يخفّ التلامس المثبط ذاتيًا وتُحرر الوحدات الفرعية C النشطة أحادية الوحدة. يتشارك PKA خصوصية الركيزة مع Akt (PKB) وPKC، والتي تتميز بوجود أرجينين في الموضع -3 بالنسبة لبقايا السيرين أو الثريونين المفسفرة (2). الركائز التي تُظهر هذا التسلسل المتفق عليه والتي ثبت أنها تُفسفر بواسطة PKA هي Bad (Ser155) وCREB (Ser133) وGSK-3 (GSK-3α Ser21 وGSK-3β Ser9) (3-5). بالإضافة إلى ذلك، فإن التثبيط المشترك لـ PKA C-α و-β يمنع فسفرة Raf (Ser43 وSer259) بوساطة cAMP (6). الفسفرة الذاتية والفسفرة بواسطة PDK-1 آليتان معروفتان مسؤولتان عن فسفرة الوحدة الفرعية C عند Thr197 (7). تم استخدام الحمض النووي الريبي المتداخل الصغير (siRNA) لإسكات PKA C-α بشكل خاص في خلايا NIH/3T3 (6). أسماء بديلة بروتين كيناز A؛ بروتين كيناز A C؛ بروتين كيناز A C ألفا؛ بروتين كيناز A siRNA؛ بروتين كيناز A مواصفة التفاعل: H