CST، 6562S، SignalSilence® p53 siRNA II

استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) لدراسة البروتين p53 في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج توصي شركة CST بإجراء عملية نقل الجينات باستخدام 100 نانومتر من SignalSilence® p53 siRNA II قبل 48 إلى 72 ساعة من تحلل الخلايا. لإجراء عملية نقل الجينات، اتبع البروتوكول المقدم من الشركة المصنعة لكاشف نقل الجينات. لا تتردد في الاتصال بشركة CST لأي استفسارات حول الاستخدام. تحتوي كل قارورة على ما يعادل 100 عملية نقل جينات، وهو ما يتوافق مع تركيز نهائي لـ siRNA يبلغ 100 نانومتر لكل عملية نقل جينات في صفيحة ذات 24 بئراً بحجم إجمالي 300 ميكرولتر لكل بئر. تخزين يُزوَّد منتج SignalSilence® siRNA في ماء خالٍ من إنزيم RNase. قسّم المنتج إلى حصص صغيرة وخزّنها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية يلعب بروتين p53 الكابت للورم دورًا رئيسيًا في استجابة الخلية لتلف الحمض النووي وغيره من التشوهات الجينية. يمكن أن يؤدي تنشيط p53 إما إلى توقف دورة الخلية وإصلاح الحمض النووي أو إلى موت الخلية المبرمج (1). يُفسفر p53 في مواقع متعددة بواسطة العديد من كينازات البروتين المختلفة (2، 3). يحفز تلف الحمض النووي فسفرة p53 عند Ser15 وSer20، مما يؤدي إلى انخفاض التفاعل بين p53 ومنظمه السلبي، وهو البروتين الورمي MDM2 (4). يثبط MDM2 تراكم p53 عن طريق استهدافه لعملية اليوبيكويتين والتحلل البروتيني (5، 6). يمكن فسفرة p53 بواسطة ATM وATR وDNA-PK عند Ser15 وSer37. تُضعف الفسفرة قدرة MDM2 على الارتباط بـ p53، مما يعزز تراكم وتنشيط p53 استجابةً لتلف الحمض النووي (4، 7). يمكن لـ Chk2 وChk1 فسفرة p53 عند Ser20، مما يعزز تكوينه الرباعي، واستقراره، ونشاطه (8، 9). تتم فسفرة p53 عند Ser392 (10، 11) بواسطة CAK (11). تزداد فسفرة p53 عند Ser392 في الأورام البشرية (12)، وقد أُبلغ عن تأثيرها على وظيفة كبح النمو، وارتباط الحمض النووي، والتنشيط النسخي لـ p53 (10، 13، 14). تتم فسفرة p53 عند Ser6 وSer9 بواسطة CK1δ وCK1ε (13، 15). تنظم فسفرة p53 عند Ser46 قدرة p53 على تحفيز موت الخلايا المبرمج (16). تتم أستلة p53 بواسطة إنزيمات الأسيتيل ترانسفيراز p300 وCBP. يؤدي تثبيط عملية إزالة الأسيتيل، التي تمنع MDM2 من استقطاب مُركّب HDAC1 بواسطة p19 (ARF)، إلى استقرار p53. ويبدو أن الأسيتيل يلعب دورًا إيجابيًا في تراكم بروتين p53 استجابةً للإجهاد (17). بعد تلف الحمض النووي، يُصبح p53 البشري مُؤَسْتَلًا عند الليسين 382 (الليسين 379 في الفأر) لتعزيز ارتباط p53 بالحمض النووي (18). وتحدث إزالة الأسيتيل من p53 من خلال التفاعل مع بروتين SIRT1، وهو إنزيم نازع للأسيتيل قد يكون له دور في شيخوخة الخلايا واستجابة تلف الحمض النووي (19). أسماء بديلة p53؛ siRNA مواصفة التفاعل: H