CST، 7000S، SignalSilence® ULK1 siRNA I

استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) لدراسة ULK1 في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج توصي شركة CST بإجراء عملية نقل الجينات باستخدام 100 نانومتر من SignalSilence® ULK1 siRNA I قبل 48 إلى 72 ساعة من تحلل الخلايا. لإجراء عملية نقل الجينات، اتبع البروتوكول المقدم من الشركة المصنعة لكاشف نقل الجينات. لا تتردد في الاتصال بشركة CST لأي استفسارات حول الاستخدام. تحتوي كل قارورة على ما يعادل 100 عملية نقل جينات، وهو ما يتوافق مع تركيز نهائي لـ siRNA يبلغ 100 نانومتر لكل عملية نقل جينات في صفيحة ذات 24 بئراً بحجم إجمالي 300 ميكرولتر لكل بئر. تخزين يُزوَّد منتج SignalSilence® siRNA في ماء خالٍ من إنزيم RNase. قسّم المنتج إلى حصص صغيرة وخزّنها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية تم اكتشاف اثنين من كينازات السيرين/ثريونين المتشابهة، وهما كيناز UNC-51-like 1 و2 (ULK1 وULK2)، كمتماثلات ثديية للجين الذي أظهرت طفراته امتدادًا ونموًا غير طبيعيين للمحاور العصبية (1-4). يُعبر عن كلا البروتينين على نطاق واسع، ويحتويان على نطاق كيناز في الطرف الأميني، يليه نطاق مركزي غني بالبرولين/السيرين، ونطاق كربوكسيلي محفوظ للغاية في الطرف الكربوكسيلي. رُبطت أدوار ULK1 وULK2 في نمو المحاور العصبية بدراسات أظهرت أن الكينازات تتمركز في مخاريط نمو الخلايا العصبية، وتشارك في عملية الإدخال الخلوي لعوامل النمو الأساسية، مثل NGF (5). وجدت دراسات التفاعل الثنائي في الخميرة أن ULK1/2 مرتبط بمعدلات مسار الإدخال الخلوي، SynGAP، والسينتينين (6). كما تم التعرف على التشابه البنيوي بين ULK1/2 وبروتين الالتهام الذاتي في الخميرة Atg1/Apg1 (7). أظهرت تجارب تثبيط التعبير الجيني باستخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) أن ULK1 ضروري لعملية الالتهام الذاتي (8)، وهي عملية هدمية لتفكيك محتويات السيتوبلازم (9، 10). ويبدو أن Atg1/ULK1 يعمل كنقطة التقاء لإشارات متعددة تتحكم في الالتهام الذاتي (11)، ويمكنه الارتباط بالعديد من البروتينات المرتبطة بالالتهام الذاتي (Atg)، مما ينظم حالات الفسفرة ونقل البروتين (12-16). يقوم AMPK، الذي ينشط في ظروف نقص المغذيات، بفسفرة ULK1 مباشرةً في مواقع متعددة، بما في ذلك Ser317 وSer555 وSer777 (17، 18). في المقابل، يقوم mTOR، وهو منظم لنمو الخلايا ومثبط للالتهام الذاتي، بفسفرة ULK1 عند Ser757، مما يعطل التفاعل بين ULK1 وAMPK (17). مواصفة التفاعل: H