CST، 7018S، محلول تحلل PathScan® Sandwich ELISA (1X)

مساحة احتياطية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج 1. قم بإذابة محلول التحلل 10x عند درجة حرارة 24-30 درجة مئوية مع التقليب المستمر. 2. خفف محلول تحلل ELISA 10x إلى محلول 1x باستخدام الماء المقطر (ddH2O). 3. ضع محلول التحلل 1x في الثلاجة وأضف 1 ملي مول من مثبط البروتياز PMSF قبل الاستخدام مباشرة. التحلل: يجب حفظ جميع الكواشف والمستخلصات باردة. 1. عالج الخلايا حسب الرغبة. 2. اغسل الطبق بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) لإزالة أي بقايا من الوسط الزرعي. 3. أضف محلول التحلل 1x إلى الخلايا: (أ) للخلايا الملتصقة، أضف 500-1000 ميكرولتر من محلول تحلل ELISA 1x لكل طبق 10 سم. (ب) للخلايا غير الملتصقة، يجب تقدير كمية محلول التحلل المراد إضافتها. عادةً ما تكون إضافة حجم مساوٍ لحجم الخلايا المترسبة مناسبة. 4. حضّن الطبق على الثلج لمدة دقيقتين. 5. اجمع محلول مستخلص الخلايا لاستخدامه. ٦. قم بفصل المستخلص بالطرد المركزي لمدة ٥ دقائق عند ١٤٠٠٠ ضعف قوة الجاذبية الأرضية في جهاز طرد مركزي بارد. ٧. تخلص من السائل الطافي لاستخدامه. يمكن إضافة مثبطات البروتياز الإضافية إلى محلول التحلل ١X بسهولة. تخزين محلول تحلل ELISA بتركيز 1X: 20 ملي مولار Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 7.5)، 150 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار EDTA ثنائي الصوديوم، 1 ملي مولار EGTA، 1% تريتون، 20 ملي مولار بيروفوسفات الصوديوم، 25 ملي مولار فلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار بيتا-جليسروفوسفات، 1 ملي مولار Na3VO4، 1 ميكروغرام/مل ليوبيبتين. للتخزين طويل الأمد، يُحفظ المحلول بتركيز 10X عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. في حال الاستخدام المتواصل للمحلول، يُنصح بحفظه عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة أسبوع إلى أسبوعين. يُنصح بتقسيم المحلول بتركيز 10X إلى حصص صغيرة عند إجراء العديد من التجارب الصغيرة. كما يمكن تقسيم المحلول بتركيز 1X إلى حصص للاستخدام الفردي وتخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. خلفية تم تطوير محلول التحلل PathScan Sandwich ELISA (1X) لتطبيقات ELISA وتم تركيبه لتحسين تثبيط فئة الفوسفاتازات من نوع سيرين / ثريونين بعد تحضير مستخلصات الخلايا.