CST، 75964S، PTMScan® ببتيدات التحكم يوبيكويتين/سومو

مستخلصات الخلايا للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج يُستخدم مع بروتوكول مجموعة PTMScan® من شركة Cell Signaling Technology بدءًا من خطوة تنقية المناعة (IAP). نظرًا لأن الكمية المثلى من ببتيدات التحكم PTMScan® Ubiquitin/SUMO لتجارب كل مستخدم تعتمد على عوامل فريدة مثل حساسية مطياف الكتلة، يمكن للمستخدمين تخفيف هذه الببتيدات حسب الحاجة. 1. قسّم ببتيدات التحكم PTMScan® Ubiquitin/SUMO إلى حصص صغيرة للتخزين كوحدات للاستخدام الفردي عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو استخدمها مباشرةً. 2. أعد تعليق ببتيدات العينة في المحلول المنظم والحجم المناسبين، على سبيل المثال، 1.4 مل من محلول PTMScan® IAP المنظم (1X). 3. صفِّ ببتيدات العينة بالطرد المركزي. 4. انقل ببتيدات العينة المصفاة إلى أنابيب تحتوي على خرز IAP. ٥. أضف ١٠ ميكرولتر من محلول PTMScan® Control Peptides Ubiquitin/SUMO إلى خرز IAP والببتيدات المأخوذة منها العينات، واخلط جيدًا. ٦. تابع إجراءات PTMScan® أو PTMScan® HS عند خطوة الحضانة لمدة ساعتين. ٧. اكشف عن PTMScan® Control Peptides Ubiquitin/SUMO في ملف بيانات LCMS. تخزين هذا المنتج مستقر لمدة 24 شهرًا عند تخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يُنصح بتقسيمه إلى حصص صغيرة لتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. خلفية اليوبيكويتين وحدة ببتيدية محفوظة تلعب دورًا هامًا في مسار اليوبيكويتين-بروتيازوم. يرتبط اليوبيكويتين تساهميًا بالعديد من البروتينات الخلوية عبر عملية اليوبيكويتين، التي تستهدف البروتينات لتحللها بواسطة البروتيازوم 26S. تتضمن عملية اقتران اليوبيكويتين بالبروتين المستهدف ثلاثة مكونات. يُنشط اليوبيكويتين أولًا بتكوين معقد ثيول إستر مع مكون التنشيط E1؛ ثم يُنقل اليوبيكويتين المنشط إلى بروتين حامل اليوبيكويتين E2، ومن E2 إلى إنزيم ربط اليوبيكويتين E3 لتوصيله النهائي إلى مجموعة الأمين (ε-NH2) في بقايا الليسين (1-3) من البروتين المستهدف. وقد ثبت تورط مسار اليوبيكويتين-بروتيازوم في نطاق واسع من العمليات البيولوجية الطبيعية وفي التشوهات المرتبطة بالأمراض. أظهرت العديد من البروتينات، مثل IκB وp53 وcdc25A وBcl-2، أنها أهداف لعملية اليوبيكويتين-بروتيازوم كجزء من تنظيم تقدم دورة الخلية، والتمايز، والاستجابة للإجهاد الخلوي، والاستماتة (4-7). وتُعدّ مُعدِّلات اليوبيكويتين الصغيرة المرتبطة 1 و2 و3 (SUMO-1 و-2 و-3) أعضاءً في عائلة البروتينات الشبيهة باليوبيكويتين (8). ويُشابه الارتباط التساهمي لـ SUMO-1 أو -2 أو -3 (السومويليشن) بالبروتينات المستهدفة عملية اليوبيكويتين. ويستهدف كلٌّ من اليوبيكويتين وأفراد عائلة SUMO بروتينات مختلفة ذات وظائف بيولوجية متنوعة. ويُنظِّم اليوبيكويتين في المقام الأول تحلل هدفه (8). في المقابل، يرتبط بروتين SUMO-1 ببروتينات RanGAP وPML وp53 وIκB-α، وينظم النقل النووي، ويُشكل تراكيب دون نووية، وينظم النشاط النسخي واستقرار البروتين (9-13). أما بروتينا SUMO-2 وSUMO-3 فيشكلان سلاسل متعددة من بروتين SUMO، ويرتبطان بإنزيم توبويزوميراز II وبروتين APP، وينظمان انفصال الكروموسومات والاستجابات الخلوية للإجهاد البيئي، ويلعبان دورًا في تطور مرض الزهايمر (14-17).