CST، 82456S، مجموعة التلوين المزدوج IHC من SignalStain® (HRP، أرنب، بني / AP، فأر، أحمر)

مجموعة أدوات نظام الكشف للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج قبل إجراء تجربة التلوين المزدوج، يُنصح بضبط كل جسم مضاد أولي لمدة ساعة واحدة للحضانة الأولية. إذا لم يكن محلول استرجاع المستضد الموصى به هو نفسه لكل جسم مضاد، فيُنصح باستخدام EDTA لكلا الجسمين. إذا لم تكن الأجسام المضادة الأولية متوافقة مع نفس مخفف الأجسام المضادة، فيُنصح بإجراء خطوات الحضانة الأولية والكشف بالتتابع. بعد تحديد التخفيف المناسب للأجسام المضادة، يُنصح باختبار ترتيب تطوير الكروموجين. قد تختلف جودة النتائج باختلاف الكروموجين المستخدم أولاً. يتم ذلك بوضع الأجسام المضادة الأولية على شريحتين للحضانة الأولية. يجب أن تُطوّر إحدى الشريحتين أولاً باستخدام DAB، ثم Vibrant Red. أما الشريحة الأخرى، فيجب أن تُطوّر Vibrant Red أولاً، ثم DAB. راجع الشريحتين وحدد ترتيب الكروموجينات الذي يُعطي أفضل النتائج. تحضير كاشف الركيزة: مجموعة ركيزة SignalStain® DAB رقم 8059: 1. لتحضير محلول DAB العامل، أضف 30 ميكرولتر من مُركّز الكروموجين SignalStain® DAB إلى 1 مل من مُخفّف SignalStain® DAB. امزج جيدًا قبل الاستخدام. تبقى محاليل العمل ثابتة لمدة تصل إلى 14 يومًا عند تخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية، أو لمدة تصل إلى 5 أيام عند تخزينها في درجة حرارة الغرفة (حوالي 25 درجة مئوية). قد يتغير لون المحلول خلال هذه الفترة، لكن ذلك لن يؤثر على جودة التلوين. 2. بعد التحضين مع كاشف الكشف المناعي النسيجي SignalStain® Boost أو أنظمة الكشف الأخرى القائمة على بيروكسيداز الفجل (HRP)، اغسل الشرائح وحضّنها مع محلول العمل في درجة حرارة الغرفة حتى يظهر التلوين. عادةً ما توفر فترة من 1 إلى 10 دقائق كثافة تلوين مقبولة. مجموعة ركيزة الفوسفاتاز القلوي سيجنال ستين® فايبرانت ريد #76713: هام: لا تقم بتسخين مكونات مجموعة فايبرانت ريد أو محلول العمل. 1. لتحضير محلول العمل فايبرانت ريد، أضف إلى 5 مل من مخفف سيجنال ستين® فايبرانت ريد 1 و50 ميكرولتر من كاشف سيجنال ستين® فايبرانت ريد 2. امزج جيدًا قبل الاستخدام. يجب استخدام محاليل العمل في غضون 15 دقيقة من التحضير. 2. بعد التحضين مع كاشف الكشف المناعي النسيجي سيجنال ستين® بوست، اغسل الشرائح وحضّنها مع محلول العمل في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة. إجراء التلوين: 1. بالنسبة للمقاطع المضمنة في البارافين، قم بإزالة البارافين وترطيب مقاطع الأنسجة باستخدام الزيلين أو عوامل التصفية الأخرى وسلسلة الكحول المتدرجة. ٢. قم بإجراء استرجاع المستضد وفقًا لتوصيات الشركة المصنعة للأجسام المضادة الأولية. إذا لم يكن محلول استرجاع المستضد الموصى به هو نفسه لكل جسم مضاد، فيُقترح استخدام EDTA لكلا الجسمين المضادين. ٣. بعد الغسل، حضّن المقاطع في محلول بيروكسيد الهيدروجين ٣٪ مخفف في الماء لمدة ١٠ دقائق. ٤. اغسل المقاطع في الماء المقطر مرتين، كل مرة لمدة ٥ دقائق. ٥. حضّن المقاطع لمدة ٣٠ دقيقة في محلول الحجب. ٦. أزل محلول الحجب من المقاطع وحضّنها مع الأجسام المضادة الأولية للأرانب والفئران المخففة في مخفف الأجسام المضادة المناسب وفقًا لتوصيات الشركة المصنعة للأجسام المضادة الأولية. إذا لم تكن الأجسام المضادة الأولية متوافقة مع نفس مخفف الأجسام المضادة، فيُنصح بإجراء خطوات التحضين والكشف الأولية بالتتابع. ٧. اغسل. ٨. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة إما مع كاشف الكشف AP أو HRP Boost الذي تم تحديده مسبقًا كخطوة أولى. ٩. اغسل. ١٠. ضع الركيزة المتوافقة مع AP أو HRP، بما يتوافق مع كاشف الكشف المعزز المستخدم أولاً، وقم بالتظهير للمدة الموصى بها. انظر تحضير كاشف الركيزة أدناه. ١١. اغسل. ١٢. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة باستخدام كاشف الكشف المعزز AP أو HRP الذي تم تحديده سابقًا كعامل ثانٍ. ١٣. اغسل. ١٤. ضع الركيزة المتوافقة مع AP أو HRP، بما يتوافق مع كاشف الكشف المعزز المستخدم ثانيًا، وقم بالتظهير للمدة الموصى بها. انظر تحضير كاشف الركيزة أدناه. ١٥. اغسل. ١٦. قم بالتلوين المضاد (اختياري)، ثم قم بتنظيف الشرائح الزجاجية وتثبيتها. تخزين جميع المكونات الموجودة في هذه المجموعة مستقرة لمدة 12 شهرًا على الأقل بعد تاريخ الصلاحية المذكور على ملصق المكون عند تخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية وتركها دون استخدام.