CST، 9006S، خرز مغناطيسي من نوع بروتين G من الدرجة المستخدمة في تقنية ChIP

كواشف التقارب والتنقية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج قم برجّ الأنبوب لفترة وجيزة لإعادة تعليق الخرز. أضف 30 ميكرولتر من معلق الخرز إلى كل تفاعل ترسيب مناعي للكروماتين (ChIP). لغسل الخرز وفصل المعقدات المناعية لاحقًا، يمكن فصل الخرز عن المحلول باستخدام حامل الفصل المغناطيسي ذي الستة أنابيب رقم 7017. ضع الأنابيب التي تحتوي على الخرز في حامل الفصل المغناطيسي وانتظر من دقيقة إلى دقيقتين حتى يصبح المحلول صافيًا قبل إزالة السائل الطافي بعناية. أخرج الأنابيب من حامل الفصل المغناطيسي، وأضف محلولًا جديدًا، وأعد تعليق الخرز عن طريق رجّ الأنبوب برفق أو هزّه. تخزين يُقدّم في محلول فوسفات ملحي (درجة حموضة 7.2)، يحتوي على 0.05% من مادة توين 20، و0.1% من ألبومين المصل البقري، و0.05% من أزيد الصوديوم. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. هذا المنتج صالح للاستخدام لمدة 12 شهرًا. خلفية يُعدّ اختبار الترسيب المناعي للكروماتين (ChIP) تقنيةً فعّالةً ومتعددة الاستخدامات لدراسة تفاعلات البروتين مع الحمض النووي (DNA) ضمن سياق الكروماتين الطبيعي للخلية (1، 2). يُمكن استخدام هذا الاختبار لتحديد العديد من البروتينات المرتبطة بمنطقة مُحددة من الجينوم، أو على العكس، لتحديد العديد من مناطق الجينوم التي يرتبط بها بروتين مُعين (3-6). كما يُمكن استخدامه لتحديد الترتيب المُحدد لاستقطاب البروتينات المختلفة إلى مُحفز الجين، أو لقياس الكمية النسبية لتعديل هيستون مُعين عبر موقع جيني كامل (3، 4). بالإضافة إلى بروتينات الهيستون، يُمكن استخدام اختبار ChIP لتحليل ارتباط عوامل النسخ والعوامل المُساعدة، وعوامل تضاعف الحمض النووي، وبروتينات إصلاح الحمض النووي. عند إجراء اختبار ChIP، تُثبّت الخلايا أو الأنسجة أولاً بالفورمالديهايد، وهو عامل ربط مُتبادل قابل للعكس بين البروتين والحمض النووي، والذي يحافظ على تفاعلات البروتين مع الحمض النووي التي تحدث في الخلية (1، 2). تُحلل الخلايا ويُستخلص الكروماتين ويُجزأ باستخدام الموجات فوق الصوتية أو الهضم الأنزيمي. ثم يُخضع الكروماتين لعملية ترسيب مناعي باستخدام أجسام مضادة نوعية لبروتين معين أو تعديل هيستوني محدد. أي تسلسلات DNA مرتبطة بالبروتين أو التعديل الهيستوني محل الاهتمام ستترسب مع الكروماتين كجزء من المركب الكروماتيني المتشابك، وستزداد الكمية النسبية لهذا التسلسل DNA من خلال عملية الانتقاء المناعي. بعد الترسيب المناعي، تُفك روابط البروتين-DNA المتشابكة ويُنقى الحمض النووي. يمكن استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل القياسي (PCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qPCR) لقياس مقدار زيادة تسلسل DNA معين بواسطة الترسيب المناعي النوعي للبروتين (1، 2). بدلاً من ذلك، يمكن دمج فحص ChIP مع تقنيات المصفوفات الدقيقة لتقسيم الجينوم (ChIP على رقاقة)، ​​أو التسلسل عالي الإنتاجية، أو استراتيجيات الاستنساخ، وكلها تسمح بتحليل شامل للجينوم لتفاعلات البروتين-DNA وتعديلات الهيستون (5-8). أسماء بديلة رقاقة؛ رقاقة على رقاقة؛ رقاقة مُدققة؛ مجموعة رقائق؛ ترسيب مناعي للكروماتين؛ ترسيب مناعي؛ خرز مغناطيسي؛ بروتين أ؛ بروتين ج