CST، 9803S، محلول تحلل الخلايا (10X)

مساحة احتياطية للدراسة في مجال البحث. معلومات استخدام المنتج 1. قم بإذابة محلول التحلل الخلوي بتركيز 10x عند درجة حرارة 24-30 درجة مئوية مع التقليب المستمر. 2. خفف محلول التحلل الخلوي بتركيز 10x إلى محلول بتركيز 1x باستخدام الماء المقطر (ddH2O). يوفر هذا المنتج كمية كافية من محلول التحلل الخلوي بتركيز 10x لتحضير 150 مل من مستخلص الخلية الكاملة. 3. ضع محلول التحلل الخلوي بتركيز 1x في الثلاجة وأضف مثبط البروتياز PMSF قبل الاستخدام مباشرة. التحلل: يجب حفظ جميع الكواشف والمستخلصات باردة. 1. عالج الخلايا حسب الرغبة. 2. اغسل الطبق بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) لإزالة أي بقايا من الوسط الزرعي. 3. أضف محلول التحلل الخلوي بتركيز 1x إلى الخلايا: (أ) للخلايا الملتصقة، أضف 400 ميكرولتر من محلول التحلل الخلوي بتركيز 1x لكل طبق 10 سم. (ب) للخلايا غير الملتصقة، أضف 400 ميكرولتر من محلول التحلل الخلوي لكل 10⁷ خلية بعد غسلها بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1x وترسيبها. ٤. حضّن الطبق على الجليد لمدة ٥ دقائق. ٥. اكشط الخلايا. ٦. عالج بالموجات فوق الصوتية لفترة وجيزة. ٧. افصل المستخلص بالطرد المركزي لمدة ٥ دقائق عند ١٤٠٠٠ × جم في جهاز طرد مركزي بارد. ٨. تخلص من السائل الطافي لاستخدامه. يمكن استخدام محلول تحلل الخلايا ١X لتحليل عينات الأنسجة، على الرغم من أنه يوصى بخطوة تجانس بعد إضافة محلول التحلل. استخلص النسيج بنسبة ١٠٠ ملغ من النسيج إلى ١ مل من المحلول. يلزم أيضًا معالجة مستخلص النسيج بالموجات فوق الصوتية. يمكن إضافة مثبطات البروتياز الإضافية إلى محلول التحلل ١X دون أي صعوبات. تخزين محلول تحلل الخلايا 1X: 20 ملي مولار Tris-HCl (الأس الهيدروجيني 7.5)، 150 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار Na2EDTA، 1 ملي مولار EGTA، 1% Triton، 2.5 ملي مولار بيروفوسفات الصوديوم، 1 ملي مولار بيتا-جليسروفوسفات، 1 ملي مولار Na3VO4، 1 ميكروغرام/مل ليوبيبتين. للتخزين طويل الأمد، يُحفظ محلول 10X عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. في حال الاستخدام المتواصل، يُنصح بحفظ محلول 10X عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة أسبوع إلى أسبوعين. يُنصح بتقسيم محلول 10X إلى حصص صغيرة عند إجراء العديد من التجارب الصغيرة. يمكن أيضًا تقسيم محلول 1X إلى حصص للاستخدام الفردي وتخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية.