نظام وسم الحمض النووي Amersham Rediprime II، Cytiva، RPN1633

نظام Rediprime II لتوسيم الحمض النووي
يوفر نظام Rediprime II لوسم الحمض النووي مزيج تفاعل مُوزّع بشكل فردي، يُجفف بوجود مُثبّت وصبغة لتسهيل عملية وسم المجسات. صُممت مزيجات تفاعل Rediprime باستخدام إنزيم Klenow المُحسّن الخالي من الإكسونوكلياز، لإنتاج مجسات ذات نشاط إشعاعي نوعي يبلغ 1.9 × 10⁹ دقيقة/ميكروغرام أو أكثر بعد 10 دقائق من الحضانة عند 37 درجة مئوية مع معظم ركائز الحمض النووي. باستبدال نيوكليوتيد غير مُشعّ بنظيره المُشعّ في مزيج التفاعل، يُصبح الحمض النووي المُصنّع حديثًا مُشعًّا. يُمكن وسم كميات ضئيلة جدًا من الحمض النووي المُدخل، مما يُتيح إنتاج مجسات ذات نشاط إشعاعي نوعي عالٍ جدًا بكميات قليلة نسبيًا من النيوكليوتيدات المُضافة. يُمكن بعد ذلك استخدام هذه الشظايا المُشعّة كمجسات تهجين حساسة لمجموعة واسعة من التطبيقات القائمة على الترشيح.
• مدة صلاحية طويلة وبروتوكول بسيط وسريع.
• تفاعلات مستقرة في درجة حرارة الغرفة مع فحص اللون لوضع علامات على الحمض النووي لأنشطة محددة > 10⁹ dpm/µg.
• لا حاجة لإزالة النيوكليوتيدات غير المدمجة قبل التهجين.
• يمكن وسم الحمض النووي في المحلول أو في وجود الأجاروز ذي نقطة الانصهار المنخفضة.
• يكتمل تفاعل الوسم في غضون 10 دقائق.
يتكون Rediprime II من مزيج مُسبق الخلط، مُوزّع بشكل فردي، لتفاعلات البادئة العشوائية، مُجفف بالتجميد لضمان استقراره في درجة حرارة الغرفة. ما عليك سوى إضافة الركيزة و[α-32P]dCTP. يُمكن استخدام 25 نانوغرام فقط من الحمض النووي للركيزة. مُناسب للاستخدام مع dCTP فقط. يحتوي كل نظام على الكواشف التالية، تكفي لـ 30 أو 60 تفاعلًا (حسب المنتج المطلوب): أنابيب مُسبقة الخلط والتوزيع تحتوي على مزيج الوسم بتركيز 30× وحمض نووي للتحكم.
أدخل فاينبرغ وفوجلشتاين استخدام تسلسلات عشوائية من النيوكليوتيدات السداسية لبدء عملية تخليق الحمض النووي على قالب الحمض النووي المتفكك في مواقع متعددة على طوله. يُعدّ مُركّب البادئ-القالب ركيزةً لجزء كلينو من بوليميراز الحمض النووي الأول. وباستبدال نيوكليوتيد غير مشعّ بنظيره المشعّ في مزيج التفاعل، يصبح الحمض النووي المُصنّع حديثًا مشعًّا. يمكن وسم كميات ضئيلة جدًا من الحمض النووي المُدخل، مما يُتيح إنتاج مجسات ذات نشاط إشعاعي نوعي عالٍ جدًا بكميات قليلة نسبيًا من النيوكليوتيدات المُضافة. بعد ذلك، يُمكن استخدام هذه الشظايا الموسومة إشعاعيًا كمجسات تهجين حساسة لمجموعة واسعة من التطبيقات القائمة على الترشيح.