مجموعة استنساخ T7Select® 415-1 من شركة ميرك، 70015-3CN

نظام عرض العاثيات T7Select® من نوفاجين هو نظام عرض عاثيات مبتكر يستفيد من خصائص العاثية T7. يتميز هذا النظام بسهولة استخدامه وقدرته على عرض ببتيدات يصل طولها إلى 50 حمضًا أمينيًا تقريبًا بأعداد نسخ عالية (415 نسخة لكل عاثية)، وببتيدات أو بروتينات يصل طولها إلى 1200 حمض أميني تقريبًا بأعداد نسخ منخفضة (0.1-1 نسخة لكل عاثية) أو متوسطة (5-15 نسخة لكل عاثية). يتم تجميع العاثيات في سيتوبلازم بكتيريا الإشريكية القولونية، وتُطلق العاثيات الناضجة عند تحلل الخلية. على عكس الأنظمة الخيطية، لا تحتاج الببتيدات أو البروتينات المعروضة على سطح T7 إلى القدرة على الإفراز عبر غشاء الخلية، وهي خطوة ضرورية في تجميع العاثيات الخيطية. تتمتع T7 بخصائص إضافية تجعلها ناقل عرض جذابًا، فهي سهلة النمو وتتكاثر بسرعة أكبر من العاثية T7 أو العاثيات الخيطية. تتشكل اللويحات خلال 3 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، وتتحلل المزارع بعد ساعة إلى ساعتين من الإصابة، مما يقلل الوقت اللازم لإجراء دورات النمو المتعددة المطلوبة عادةً للاختيار. جسيم العاثية T7 قوي للغاية، ومستقر في الظروف القاسية التي تُعطل العاثيات الأخرى. هذا الاستقرار يُوسع نطاق العوامل التي يمكن استخدامها في إجراءات الاختيار الحيوي، والتي تتطلب أن تظل العاثية مُعدية. تُعد T7 ناقل استنساخ عام ممتاز. يسهل الحصول على الحمض النووي النقي بكميات كبيرة، وقد تم إثبات نظام تغليف عالي الكفاءة في المختبر (2)، كما أن الحمض النووي مُتسلسل بالكامل (39937 زوجًا قاعديًا)، لذا فإن التقييد أو تحليل تسلسل الحمض النووي للمستنسخات أمر بسيط للغاية. يستخدم نظام عرض العاثية T7Select بروتين غلاف T7 لعرض الببتيدات أو البروتينات على سطح العاثية. يُصنع بروتين الغلاف عادةً في شكلين، 10A (344 حمضًا أمينيًا) و10B (397 حمضًا أمينيًا). ينتج البروتين 10B عن انزياح إطار القراءة عند الحمض الأميني 341 من البروتين 10A، ويشكل عادةً حوالي 10% من بروتين الغلاف. مع ذلك، يمكن أن تتكون الأغلفة الوظيفية بالكامل إما من البروتين 10A أو 10B، أو بنسب متفاوتة من هذين البروتينين. وقد قدمت هذه النتيجة اقتراحًا أوليًا بأن غلاف فيروس T7 يمكن أن يستوعب هذا التباين، وأن المنطقة الفريدة من بروتين الغلاف الخاصة بالبروتين 10B قد تكون على سطح العاثية ويمكن استخدامها لعرض العاثيات. توجد ثلاثة أنواع أساسية من نواقل عرض العاثيات T7Select: ناقل T7Select415 لعرض عدد كبير من نسخ الببتيدات، وناقل T7Select10 لعرض عدد متوسط ​​من نسخ الببتيدات أو البروتينات الأكبر حجمًا، ونواقل T7Select1 لعرض عدد قليل من نسخ الببتيدات أو البروتينات الأكبر حجمًا. في جميع النواقل، تُستنسخ التسلسلات المشفرة للببتيدات أو البروتينات المراد عرضها ضمن سلسلة من مواقع الاستنساخ المتعددة بعد الحمض الأميني 348 من بروتين 10B. وقد أُزيل موقع إزاحة الإطار الترجمي الطبيعي داخل جين الغلاف البروتيني، لذا لا يُنتج من هذه النواقل سوى شكل واحد من بروتين الغلاف البروتيني.