نيو إنجلاند بيولابس، B0303S، محلول تفاعل ديوكسي ريبونيوكلياز I

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونوكليازات غير المتخصصة، المحاليل المنظمة، التطبيقات: استنساخ الحمض النووي الريبي، المواصفات: محلول منظم 1X، المكونات: 10 ملي مولار Tris-HCl، 2.5 ملي مولار MgCl2، 0.5 ملي مولار CaCl2، درجة الحموضة 7.6 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: هل يعمل إنزيم DNase I في محاليل NEB المنظمة من 1 إلى 4؟ ج: نعم، ولكن ليس بكفاءة عالية. إنزيم DNase I هو إنزيم يعتمد على الكالسيوم، لذا فهو يعمل بشكل أفضل في محلوله المنظم الخاص الذي يحتوي على كلوريد الكالسيوم. يُوصى بإضافة محلول منظم DNase I أو 0.5 ملي مولار CaCl2 إلى التفاعل حتى عند استخدام محاليل NEB المنظمة من 1 إلى 4. كما أن إنزيم DNase I لا يُفضل التركيز العالي للأملاح، كما هو الحال في محلول NEB المنظم رقم 3. يعمل بكفاءة أقل في المحلول المنظم رقم 3، ولكنه سيظل يُعطي نسبة هضم تتراوح بين 50 و75%. س: هل تُوصون بخطوة تنظيف بعد تفاعل DNase I؟ ج: نعم. بحسب تطبيقاتك اللاحقة، نوصي باستخدام طريقة استخلاص الفينول/الكلوروفورم لإزالة جميع آثار الإنزيم. تكفي خطوة التثبيط الحراري لتثبيط الإنزيم، لكنها لا تزيله تمامًا. س: هل يمكنني استخدام مثبط إنزيم RNase في تفاعلي؟ ج: نعم. نوصي بذلك لمنع أي تداخل من إنزيم RNase مع تفاعلك.