نيو إنجلاند بيولابس، B0570S، محلول تفاعل DNase I-XT

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونوكليازات غير النوعية، مواصفات المحاليل المنظمة: مكونات المحلول المنظم 1X : 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار NaCl، 10 ملي مولار MgCl2، 0.5 ملي مولار CaCl2، 0.005% Tween® 20، درجة الحموضة 7.6 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما الفرق بين DNase I (NEB #M0303) وDNase I-XT (NEB #M0570)؟ ج: يُثبط DNase I بتركيزات ملحية أعلى من 50 ملي مولار. أما DNase I-XT فهو DNase I مقاوم للملح، ويحتفظ بنشاطه حتى تركيز ملحي 300 ملي مولار، ولكنه يتمتع بنشاط مثالي عند تركيزات ملحية تتراوح بين 50 و100 ملي مولار. لذلك، يُعد DNase I-XT الإنزيم المفضل لإزالة قالب الحمض النووي من تفاعل النسخ المختبري (IVT). س: هل يعمل إنزيم DNase I-XT (NEB #M0570) في محاليل NEB المنظمة من 1 إلى 4؟ ج: نعم، ولكن ليس بنفس كفاءة عمله في محلول تفاعل DNase I-XT (NEB #B0570). إنزيم DNase I-XT هو إنزيم يعتمد على الكالسيوم، ويعمل بكفاءة عالية في محلول تفاعل DNase I-XT الذي يحتوي على كلوريد الكالسيوم. يُنصح بإضافة محلول DNase I-XT أو 0.5 ملي مول من كلوريد الكالسيوم إلى التفاعل حتى عند استخدام محاليل NEB المنظمة من 1 إلى 4. س: ما هي أفضل طريقة لإزالة إنزيم DNase I-XT من التفاعل؟ ج: أفضل طريقة لإزالة إنزيم DNase I-XT من التفاعل هي إجراء استخلاص بالفينول/الكلوروفورم أو استخدام عمود طرد مركزي. لا يُنصح بالتثبيط الحراري لأنه قد لا يُعطل إنزيم DNase I-XT بالكامل، وقد يتداخل مع التطبيقات اللاحقة. س: هل يعمل إنزيم DNase I-XT في محلول rCutSmart؟ ج: نعم، يعمل إنزيم DNase I-XT في محلول rCutSmart بإضافة الكالسيوم (0.5 ملي مولار CaCl2). لمعرفة نسبة نشاطه في محلول rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart™. س: هل يُمكنني استخدام مجموعة Monarch® لتنظيف الحمض النووي الريبوزي (NEB #T2030، #T2040، #T2050) لتنظيف الحمض النووي الريبوزي المُعالج بإنزيم DNase I-XT (NEB #M0570)؟ ج: نعم، ستُزيل مجموعات Monarch® لتنظيف الحمض النووي الريبوزي أي نشاط متبقٍ لإنزيم DNase I-XT من عينات الحمض النووي الريبوزي. قد يؤدي المعالجة على العمود باستخدام DNase I/DNase I-XT في كثير من الأحيان إلى نشاط متبقٍ لـ DNase I، لذلك، لا نوصي بالمعالجة على العمود باستخدام DNase I/DNase I-XT مع مجموعة Monarch RNA Cleanup Kit، بل نوصي بالمعالجة في المحلول باستخدام DNase I /DNase I-XT قبل تنظيف الحمض النووي الريبي.