نيو إنجلاند بيولابس، B7025S، صبغة تحميل الجل، بنفسجي (6X)، بدون SDS

صبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X) هي صبغة تحميل الجل الرائدة من NEB للحصول على نطاقات واضحة ودقيقة. الفئات ذات الصلة: محاليل تحميل الجل، سلالم الحمض النووي البنفسجية سريعة التحميل، مواصفات المحاليل: مكونات محلول 1X : 2.5% فيكول®-400، 10 ملي مولار EDTA، 3.3 ملي مولار Tris-HCl، 0.02% صبغة 1، 0.001% صبغة 2، درجة الحموضة 8 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: هل لصبغة تحميل الجل البنفسجية أي مزايا على صبغة التحميل الزرقاء التقليدية؟ ج: نعم. لا تُنتج صبغة التحميل البنفسجية ظلاً تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية؛ لذلك، لا تُحجب نطاقات الجل في الصور بظل الأشعة فوق البنفسجية كما هو الحال عند استخدام صبغة بروموفينول الزرقاء التقليدية. س: كم عدد نطاقات اللون التي يجب أن أراها على الجل؟ ج: ينفصل اللون البنفسجي إلى لونين عند إجراء الفصل الكهربائي على الجل. يتحرك الشريط الأحمر/الوردي البارز بشكل مشابه لصبغة بروموفينول الأزرق (حوالي 400 زوج قاعدي على هلام أجاروز بنسبة 1%). أما الصبغة الزرقاء الفاتحة فتتحرك عند حوالي 4000 زوج قاعدي على هلام الأجاروز. س: لا أستطيع رؤية الصبغة الزرقاء عند تشغيلها على الهلام. لماذا؟ ج: الصبغة الزرقاء باهتة جدًا ولا ينبغي استخدامها كمؤشر رئيسي. الصبغة الحمراء هي المؤشر الرئيسي وتتحرك بشكل مشابه لصبغة بروموفينول الأزرق. س: كيف يتم تغليف أصباغ التحميل 6x؟ ج: يتم تغليف أصباغ التحميل في 4 قوارير سعة كل منها 1 مل، بإجمالي 4 مل. س: هل صبغة تحميل الهلام، بنفسجية (6X) أو صبغة تحميل الهلام، بنفسجية (6X)، بدون SDS متوافقة مع أصباغ ربط الحمض النووي الأخرى مثل SYBR® وGelRed™ أثناء الفصل الكهربائي الهلامي؟ ج: نظرًا لأن الأصباغ ذات الألفة العالية لربط الأحماض النووية قد تؤثر على هجرة الحمض النووي أثناء الفصل الكهربائي، يُنصح بشدة بتلوين الهلامات بعد الفصل باستخدام أصباغ SYBR أو GelRed. مع ذلك، يمكن استخدام هذه الأصباغ أيضًا كأصباغ مُسبقة الصب (داخل هلام الأغاروز). نظرًا لأن صبغة تحميل الهلام، البنفسجية (6X) تحتوي على تركيز أعلى من SDS، فقد يُلاحظ بعض التداخل عند استخدام SYBR أو GelRed كأصباغ مُسبقة الصب. عند استخدام هذه الأصباغ كأصباغ مُسبقة الصب، توصي NEB باستخدام صبغة تحميل الهلام، البنفسجية، الخالية من SDS (6X) (NEB #B7025S) بدلاً منها. يُرجى اتباع التوصيات التالية لكلا الصبغتين البنفسجيتين عند استخدام أصباغ SYBR كأصباغ مُسبقة الصب: قلل كمية الحمض النووي المُحمّل إلى 250 إلى 500 نانوغرام، واستخدم 0.5X فقط من أصباغ SYBR في الهلامات المُسبقة الصب. هذه الأصباغ أكثر حساسية بكثير من بروميد الإيثيديوم. قد ينتج تداخل الشرائط أو تلطيخها عن التحميل الزائد. عند استخدام صبغة تحميل الجل، البنفسجي (6X) B7024S، استخدم محلول TBE بدلاً من محلول TAE، حيث يزداد تداخل SDS عند استخدام محلول TAE (في الجل وكسائل تشغيل). استخدم أصباغ SYBR وفقًا لتوصيات الشركة المصنعة: أضف صبغة SYBR إلى محلول TBE أولاً، ثم أضف مزيج صبغة SYBR/TBE إلى محلول الأجاروز المنصهر. يُفضل الانتظار بضع دقائق قبل إضافة أصباغ SYBR إلى الأجاروز المنصهر. تُعطي إضافتها إلى محلول أجاروز مُبرد (أعلى من درجة حرارة التجلط، 45 درجة مئوية) نتائج أفضل. قم دائمًا بتشغيل جل أجاروز مُحضر حديثًا، لمرة واحدة فقط. إعادة تشغيل الجل ستؤدي إلى نتائج رديئة. يرجى اتباع التوصيات التالية لكلا الصبغتين البنفسجيتين عند استخدام صبغات GelRed كصبغات مُسبقة الصب: قلل كمية الحمض النووي المُحمّل إلى 60-125 نانوغرام، واستخدم 0.5X فقط من صبغة GelRed في الهلامات مُسبقة الصب. هذه الصبغة أكثر حساسية من بروميد الإيثيديوم. قد يؤدي التحميل الزائد إلى ظهور حزم غير واضحة أو مُلطخة. يُفضل الانتظار بضع دقائق قبل إضافة صبغة GelRed إلى الأغاروز المُذاب. تُعطي إضافتها إلى محلول أغاروز مُبرد (أعلى من درجة حرارة التجلط، 45 درجة مئوية) نتائج أفضل. قم دائمًا بتشغيل هلام أغاروز مُحضر حديثًا، لمرة واحدة فقط. إعادة تشغيل الهلام ستؤدي إلى نتائج رديئة. SYBR® علامة تجارية مسجلة لشركة Life Technologies Corporation، وGelRed™ علامة تجارية لشركة Biotium.