Product Description
الفئات ذات الصلة: محاليل ومخففات إنزيمات القطع المحددة. التطبيقات: هضم إنزيمات القطع. المواصفات: مكونات المحلول المنظم 1X: 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 10 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب. درجة الحموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما هي مدة صلاحية الإنزيم المخفف؟ ج: لم يتم اختبار ثبات كل إنزيم مخفف إلى أقل من تركيز البيع. ستبقى العديد من الإنزيمات نشطة لفترات طويلة عند تخزينها مخففة عند -20 درجة مئوية. استخدم ركيزة تحكم لاختبار التخفيفات المخزنة. س: لماذا لا يقطع إنزيم القطع الخاص بي الحمض النووي؟ ج: قد يكون هناك عدة أسباب مختلفة لعدم قطع إنزيم القطع الخاص بك للحمض النووي كما هو موضح في هذا الفيديو. يجب أن يكون تحضير الحمض النووي المراد قطعه خاليًا من الملوثات مثل الفينول، والكلوروفورم، والكحول، وEDTA، والمنظفات، أو الأملاح الزائدة، حيث يمكن أن تتداخل جميعها مع نشاط إنزيمات القطع. يمكن استخدام مجموعات تنقية الأحماض النووية من مونارك لتنقية عينة الحمض النووي قبل الهضم. إذا واجهت صعوبة في قطع ركيزة الحمض النووي، نوصي بإجراء تفاعل التحكم التالي: حضن الحمض النووي التجريبي في محلول التفاعل بدون إنزيم القطع (يشير تحلل الحمض النووي إلى وجود تلوث في تحضير الحمض النووي أو محلول التفاعل) مع الحمض النووي الضابط (حمض نووي يحتوي على مواقع متعددة معروفة للإنزيم، مثل حمض نووي لامدا) مع إنزيم القطع لتقييم اكتمال التفاعل بدقة أكبر. إذا تم قطع الحمض النووي الضابط بينما قاوم الحمض النووي التجريبي القطع، يمكن مزج الحمضين النوويين لتحديد ما إذا كان هناك مثبط موجود في العينة التجريبية. في حال وجود مثبط (غالبًا ما يكون ملحًا، أو EDTA، أو فينول)، فلن يتم قطع الحمض النووي الضابط بعد المزج. تتوفر أيضًا مساعدة إضافية لحل المشكلات. يُعدّ مثيلة الحمض النووي عنصرًا هامًا في عملية الهضم بالإنزيمات القاطعة. في حال الاشتباه بتثبيط المثيلة، يُرجى مراجعة الرابط الذي يشرح مثيلة dam وdcm وCpG. س: لماذا أرى حزمًا إضافية من الحمض النووي على الهلام بعد الهضم بالإنزيمات القاطعة؟ ج: قد تظهر حزم إضافية في عملية الهضم لعدة أسباب. لمزيد من التفاصيل حول هذا الموضوع، يُرجى مشاهدة الفيديو أعلاه. عادةً ما تنتج حزم الحمض النووي غير المستهدفة إما عن هضم جزئي أو عن نشاط إنزيم Star. عليك مقارنة عملية الهضم بنمط حزم الحمض النووي المتوقع. إذا كانت الحزم في كلا المسارين مشابهة للنمط المتوقع، وكانت الحزم الإضافية محصورة في الفراغات بين الحزمتين العلوية والسفلية للنمط المتوقع، فإن عملية الهضم غير مكتملة (جزئية). في هذه الحالة، قد تحتاج إلى تنقية الحمض النووي لإزالة أي شوائب، أو استخدام كمية أكبر من الإنزيم، أو زيادة وقت الحضانة لضمان اكتمال الهضم. إذا ظهرت حزم إضافية أسفل أدنى حزمة في النمط المتوقع، وتم قطع الحزم المتوقعة، فمن المرجح أن عملية الهضم تُظهر نشاطًا غير نمطي. ظروف التفاعل لديك تدفع الإنزيم إلى قطع تسلسلات DNA إضافية غير نمطية. يجب عليك إعادة عملية الهضم في ظل واحد أو أكثر من ظروف التفاعل المعدلة التالية: ∙ تقليل كمية الإنزيم ∙ تقليل وقت الحضانة ∙ زيادة حجم التفاعل أو ∙ استخدام إنزيم تقييد NEB عالي الدقة (HFTM) مناسب. س: لماذا أرى لطخة فوق حزمة البلازميد على هلام الأغاروز؟ ج: قد يشير وجود لطخة عند وزن جزيئي أعلى من حزمة البلازميد إلى تلوث العينة بالحمض النووي الجينومي. على الرغم من ندرة حدوث ذلك، إلا أنه يمكن أن يتقطع الحمض النووي الجينومي أثناء التحلل ويُنقى مع البلازميد. الرجّ الشديد أو الخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي بعد إضافة المحلول B2 سيؤدي إلى تقطيع الحمض النووي الجينومي، لذا يجب تجنبه. إذا كان المستخلص شديد اللزوجة ولا يمتزج جيدًا، استخدم عددًا أقل من الخلايا في التحضير المصغر. س: كم عدد النيوكليوتيدات التي يجب إضافتها بجوار موقع التعرف على إنزيم التقييد للحصول على قطع فعال؟ ج: بروتوكول هضم إنزيم التقييد: القطع بالقرب من نهاية الحمض النووي
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924