مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، B9003S، S-أدينوسيل ميثيونين (SAM)

الفئات ذات الصلة: محاليل ومخففات إنزيمات القطع المحددة، ناقلات الميثيل لعلم التخلق، تطبيقات المحاليل المنظمة، هضم إنزيمات القطع، الأسئلة الشائعة : س: ما هو تركيب المحلول المنظم لـ S-أدينوزيل-ميثيونين (SAM)؟ ج: يُحضر SAM في محلول من حمض الكبريتيك (H2SO4) بتركيز 0.005 مولار و10% إيثانول. درجة الحموضة 4.0 عند 25 درجة مئوية. س: هل سيثبط المحلول المنظم لـ SAM التفاعل؟ ج: تركيز SAM هو 32 ملي مولار. غالبًا ما يُستخدم بتركيز 80 ميكرومولار، أي بتخفيف 1:400. عند هذا التركيز، يكون تأثير المحلول المنظم لـ SAM ضئيلاً على التفاعلات اللاحقة. يُظهر إنزيم SssI ميثيلاز نشاطًا كاملاً عند تركيزات SAM البالغة 320 ميكرومولار، أي بتخفيف 1:100. س: ما هي ضوابط الجودة التي تُجرى على SAM؟ ج: يتم اختبار كل دفعة من SAM في تفاعل SssI (CG) Methylase (NEB# M0226) مع حمض نووي لامدا (NEB# N3011). ثم يُختبر الحمض النووي باستخدام BstUI (NEB# R0518) لتأكيد عملية المثيلة. س: هل يُزوَّد SAM بالإنزيمات التي تتطلبه في محلول التفاعل؟ ج: يُزوَّد SAM بجميع الإنزيمات التي تتطلبه. كما يمكن طلبه بشكل منفصل كمنتج NEB# B9003S (5 قوارير، كل منها 100 ميكرولتر من محلول تركيزه 32 ملي مولار). س: ما مدى استقرار SAM في التفاعل؟ ج: SAM غير مستقر عند درجة حموضة 7.5 ودرجة حرارة 37 درجة مئوية، ويجب تحضيره طازجًا قبل بدء التفاعل. س: هل يجب عليّ إضافة المزيد من SAM إلى تفاعلي؟ ج: SAM غير مستقر عند درجة حموضة 7.5 ودرجة حرارة 37 درجة مئوية. بالنسبة للتفاعلات المطولة، يمكن أن تؤدي إضافة المزيد من SAM بعد 4 ساعات إلى تحسين النتائج. مع ذلك، تتأثر تفاعلات المثيلة بشكل كبير أيضًا بـ S-أدينوزيل هوموسيستين. يرتبط S-أدينوزيل هوموسيستين، وهو ناتج ثانوي لتفاعل المثيلة، بالميثيلازات بقوة أكبر من SAM. يؤدي تثبيط S-أدينوزيل هوموسيستين إلى تقليل معدل التفاعل بشكل كبير مع مرور الوقت. قد يؤدي استخدام كمية أكبر من الإنزيم في تفاعلات أقصر إلى تحسين المثيلة.