مجموعة التنظيف السريع لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من نيو إنجلاند بيولابس، E1050S، Exo-CIP™

الفئات ذات الصلة: تفاعل البوليميراز المتسلسل وتنظيف الحمض النووي، تطبيقات تنقية الأحماض النووية، تفاعل البوليميراز المتسلسل وتنظيف التفاعل، تضخيم الحمض النووي، تفاعل البوليميراز المتسلسل وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي. الأسئلة الشائعة : س: هل يجب عليّ تنقية ناتج تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل بعد التنظيف؟ ج: لا، نواتج تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل المعالجة بـ Exo-CIP جاهزة فورًا للتطبيقات اللاحقة دون الحاجة إلى أي معالجة إضافية. س: كيف يجب عليّ تخزين العينات المعالجة بعد تفاعل التنظيف الإنزيمي؟ ج: نوصي بتخزين العينات المعالجة عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لضمان بقاء بوليميراز تفاعل البوليميراز المتسلسل غير نشط. س: لماذا تكون قراءات التسلسل أقل من 600 قاعدة على الرغم من أن مخطط الفصل الكهربائي يبدو جيدًا؟ ج: قد يكون هذا نتيجة إرسال كمية كبيرة جدًا من العينة للتسلسل وتحميل زائد على كيمياء إنهاء BigDye™. تأكد من أن حجم العينة المرسلة يتراوح بين 15 و200 فمول في حجم 3 ميكرولتر. يتوافق هذا مع كميات الكتلة التالية: حجم ناتج تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) نانوغرام من الحمض النووي (في عينة حجمها 3 ميكرولتر) 100 زوج قاعدي 1-12 500 زوج قاعدي 5-60 1000 زوج قاعدي 10-120 3000 زوج قاعدي 30-360 5000 زوج قاعدي 50-600 س: لماذا أرى قمتين (واحدة كبيرة والأخرى صغيرة) متداخلتين في موضع واحد من مخطط الفصل الكهربائي؟ ج: يمكن تفسير هذه الظاهرة بأحد الاحتمالين التاليين. الأول هو تضخيم أكثر من حجم واحد من ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل. إذا لم ينتج عن التضخيم ناتج متجانس، وتم تضخيم أكثر من نوع واحد بتسلسل متشابه مع نوع آخر، فيمكن تسلسل كليهما باستخدام بادئات التسلسل المضافة. تفسير آخر محتمل هو بقاء عينة غير معالجة على جانب أنبوب التفاعل، مما يؤدي إلى قراءات شاذة. يرجى التأكد من رجّ أنبوب التفاعل جيدًا ثم تدويره بسرعة بعد المعالجة بكواشف Exo-CIP. س: هل مزيج التفاعل الرئيسي/محلول PCR الخاص بي متوافق مع مجموعة Exo-CIP Rapid PCR Cleanup Kit؟ ج: لا حاجة لتغيير المحلول أو إضافة أي مواد. تم اختبار مجموعة Exo-CIP Rapid PCR Cleanup Kit للتأكد من توافقها مع مزيج التفاعل الرئيسي والمحاليل التالية. بالإضافة إلى ذلك، من المتوقع أن تكون المحاليل الروتينية المرفقة مع المنتجات النموذجية القائمة على إنزيم Taq من العديد من الموردين متوافقة مع هذا المنتج. في حال ملاحظة أي تداخل (بسبب وجود مُحسِّنات PCR، وما إلى ذلك)، يرجى تخفيف حجم ناتج PCR النهائي بحجم مماثل من الماء الخالي من النيوكلياز، قبل التنظيف باستخدام Exo-CIP. بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة Q5®، بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة Q5® Hot Start، مزيج رئيسي عالي الدقة 2X Q5®، مزيج رئيسي عالي الدقة 2X Q5® Hot Start، مزيج رئيسي عالي الدقة 2X NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR، مزيج رئيسي NEBNext® Ultra™ II Q5®، مزيج رئيسي Phusion® Hot Start Flex 2X، مزيج رئيسي OneTaq® Hot Start Quick-Load® 2X مع محلول منظم قياسي، مزيج رئيسي OneTaq® Hot Start Quick-Load® 2X مع محلول منظم GC، مزيج رئيسي Taq 2X، مزيج رئيسي LongAmp® Taq 2X، بوليميراز الحمض النووي Taq مع محلول منظم Taq قياسي، بوليميراز الحمض النووي Taq مع محلول منظم Thermopol®، بوليميراز الحمض النووي Phire™ Hot Start II، بوليميراز الحمض النووي Phire™ Hot Start II مع DMSO، بوليميراز الحمض النووي Platinum™ SuperFi™، مجموعة Phire™ Plant Direct PCR، محلول منظم Kapa™ HiFi PCR Fidelity، محلول منظم Kapa™ HiFi PCR GC، Kapa™ HiFi مزيج HotStart Ready Mix PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase Terra™ PCR Direct