مجموعة نيو إنجلاند بيولابس E2050S، HiScribe® T7 Quick High Yield RNA Synthesis Kit

يتضمن الآن أنبوبًا منفصلاً من DTT. الفئات ذات الصلة: تخليق sgRNA، تخليق الحمض النووي الريبي، النسخ المختبري (IVT)، محاليل النيوكليوتيدات للحمض النووي الريبي. المواصفات: المواد المطلوبة (غير متوفرة): ماء خالٍ من النيوكلياز (NEB #B1500). الأسئلة الشائعة : س: كيف يمكنني تحسين إنتاجية الحمض النووي الريبي المنخفضة من تفاعل النسخ؟ ج: إذا أنتج تفاعل النسخ باستخدام القالب الخاص بك حمضًا نوويًا ريبيًا كامل الطول، ولكن كانت الإنتاجية أقل بكثير من المتوقع، فمن المحتمل أن تكون الملوثات الموجودة في قالب الحمض النووي تثبط بوليميراز الحمض النووي الريبي، أو قد يكون تركيز الحمض النووي غير صحيح. بدلاً من ذلك، قد يلزم تنقية إضافية لقالب الحمض النووي. قد تساعد إضافة 5 ملي مولار من DTT (النهائي) إلى تفاعل النسخ أيضًا في تحسين إنتاجية الحمض النووي الريبي. س: هل النيوكليوتيدات المعدلة مضمنة في المجموعة؟ ج: النيوكليوتيدات المعدلة غير مضمنة في المجموعة، ولكن يمكن شراؤها بشكل منفصل. توفر شركة NEB النيوكليوتيدات المعدلة التالية: N1-ميثيل-سودويوريدين-5'-ثلاثي الفوسفات (NEB #N0431)، و5-ميثيل-سيتيدين-5'-ثلاثي الفوسفات (NEB #N0432)، وسودويوريدين-5'-ثلاثي الفوسفات (NEB #N0433)، و5-ميثوكسي-يوريدين-5'-ثلاثي الفوسفات (NEB #N0434). يتضمن دليل المجموعة بروتوكولًا مفصلًا لاستخدام النيوكليوتيدات المعدلة في تفاعل النسخ. س: هل أحتاج إلى إضافة DTT إلى التفاعل؟ ج: إضافة DTT (بتركيز نهائي 5 ملي مولار) إلى التفاعل اختيارية، ولكن يُنصح بها. إن بوليميراز الحمض النووي الريبي (RNA polymerase) الموجود في المجموعة حساس للأكسدة، وقد يؤدي ذلك إلى انخفاض إنتاجية الحمض النووي الريبي بمرور الوقت نتيجةً للمعالجة المتكررة، وما إلى ذلك. قد تساعد إضافة DTT إلى التفاعل في استعادة أداء المجموعة في مثل هذه الحالات. لن تؤثر إضافة DTT على التفاعل في أي حال من الأحوال.