نيو إنجلاند بيولابس، E5530S، وحدة تحليل الخلايا المفردة NEBNext®

الفئات ذات الصلة: تحضير مكتبة الحمض النووي الريبوزي (RNA) لتقنية Illumina، مواصفات تحضير مكتبة التسلسل من الجيل التالي . المواد المطلوبة (غير متوفرة) : ماء خالٍ من النيوكلياز، أنابيب ربط الحمض النووي (Eppendorf® #022431021)، جهاز التدوير الحراري، جهاز الطرد المركزي الدقيق. الأسئلة الشائعة : س: ما أنواع الخلايا التي يدعمها جهاز تحليل الخلايا المفردة NEBNext (NEB #E5530)؟ ج: تم تحسين الجهاز للاستخدام مع مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا حقيقية النواة. ومع ذلك، فإن تحليل الخلايا غير متوافق مع الخلايا المثبتة أو الخلايا ذات الجدران الخلوية (مثل الخلايا النباتية والفطرية). س: هل يمكنني إعادة تعليق الخلايا في محاليل/وسط غير محلول الفوسفات الملحي (PBS) قبل جمع الخلايا؟ ج: نوصي بشدة بإعادة تعليق الخلايا في محلول الفوسفات الملحي (PBS) قبل جمعها. إذا لم يكن محلول الفوسفات الملحي (PBS) وحده خيارًا مناسبًا، فيمكن إعادة تعليق الخلايا في محلول الفوسفات الملحي (PBS) مضافًا إليه ألبومين المصل البقري (BSA). يمكن إضافة ما يصل إلى 0.5 نانوغرام من ألبومين المصل البقري (BSA) إلى تفاعل تخليق وتضخيم الحمض النووي التكميلي (cDNA). إذا أُعيد تعليق الخلايا في وسط زراعة الخلايا، مثل DMEM مع 10% من مصل جنين البقر (FBS)، فيجب أن يكون حجم السائل المتبقي أثناء جمع الخلايا ضئيلاً (10-15 نانولتر). بالنسبة للخلايا المفروزة، لا تستخدم أكثر من 5 ميكرولتر من حجم السائل المتبقي. يُرجى مراجعة الأسئلة الشائعة. س: هل يجب فرز الخلايا في كاشف محدد؟ ج: نوصي بفرز الخلايا في محلول تحلل الخلايا 1X كما هو موضح في الدليل. س: هل يمكن استخدام الخلايا المجمدة؟ ج: نعم. يمكن فرز الخلايا في محلول تحلل الخلايا 1X، وتجميدها سريعًا، وتخزينها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية. إذا تم جمع الخلايا في محلول ملحي فوسفاتي أو ماء قبل التجميد، فقم بإعداد محلول تحلل الخلايا 1X وفقًا للقسم 1.2 (جمع الخلايا وتحللها) من الأدلة المرفقة مع مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي الريبي أحادي الخلية/منخفض المدخلات NEBNext (NEB #E6420) أو وحدة تخليق وتضخيم الحمض النووي التكميلي أحادي الخلية/منخفض المدخلات NEBNext (NEB #E6421)، مع مراعاة حجم الخلايا المخزنة فيها.