مجموعة نيو إنجلاند بيولابس، E6300S، بروتوسكريبت® لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من السلسلة الأولى

تحتوي مجموعة ProtoScript لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من السلسلة الأولى على كل ما يلزم لتخليق الحمض النووي التكميلي. الفئات ذات الصلة : تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR)، تخليق الحمض النووي التكميلي وإنزيمات النسخ العكسي. التطبيقات: تخليق الحمض النووي التكميلي، النسخ العكسي (تخليق الحمض النووي التكميلي)، تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي وتخليق الحمض النووي التكميلي. الأسئلة الشائعة : س: كيف أختار بين مجموعة LunaScript® RT SuperMix ومجموعة ProtoScript لتخليق الحمض النووي التكميلي من السلسلة الأولى؟ ج: تحتوي مجموعات تخليق الحمض النووي التكميلي من السلسلة الأولى على إنزيمات نسخ عكسي مختلفة، وتتمثل الاختلافات الرئيسية في تطبيقاتها الأساسية، وشكلها، ودرجة حرارة التفاعل. إليك ملخص لمجموعاتنا الثلاث لتخليق الحمض النووي التكميلي من السلسلة الأولى. مجموعة LunaScript RT SuperMix (E3010) مجموعة ProtoScript II لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من السلسلة الأولى (E6560) مجموعة ProtoScript لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من السلسلة الأولى (E6300) إنزيم النسخ العكسي RT Luna إنزيم النسخ العكسي ProtoScript II إنزيم النسخ العكسي M-MuLV التنسيق Supermix مزيج التفاعل، مزيج الإنزيم، البادئ مزيج التفاعل، مزيج الإنزيم، البادئ التطبيق الأساسي RT-qPCR ثنائي الخطوات نقطة النهاية RT-PCR حتى 10 كيلوبايت نقطة النهاية RT-PCR حتى 5 كيلوبايت التطبيق الثانوي نقطة النهاية RT-PCR حتى 3 كيلوبايت RT-qPCR ثنائي الخطوات RT-qPCR ثنائي الخطوات درجة حرارة التفاعل حتى 65 درجة مئوية (55 درجة مئوية مثالية) حتى 48 درجة مئوية (42 درجة مئوية مثالية) حتى 45 درجة مئوية (42 درجة مئوية مثالية) مدخلات الحمض النووي الريبي (RNA) من 1 ميكروغرام إلى 1 بيكوغرام من 1 ميكروغرام إلى 1 بيكوغرام من 1 ميكروغرام إلى حضانة 1 بيكوغرام: 25 درجة مئوية لمدة دقيقتين، 55 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، 95 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة، 25 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، 42 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة، 85 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. ميزات إضافية: صبغة تتبع زرقاء، بروتوكول سريع لمدة 13 دقيقة. س: لماذا أحصل على كمية قليلة من الحمض النووي التكميلي (cDNA)؟ ج: هناك عدة احتمالات: تحقق من سلامة الحمض النووي الريبوزي (RNA) عن طريق الفصل الكهربائي على هلام الأغاروز المُشوه (2). يجب أن يكون للحمض النووي الريبوزي نسبة امتصاص ضوئي لا تقل عن 1.7 عند 260 نانومتر إلى امتصاص ضوئي لا تقل عن 280 نانومتر. يمكن إزالة معظم الملوثات مثل EDTA والجوانيدينيوم عن طريق الترسيب بالإيثانول متبوعًا بغسل بالإيثانول بنسبة 70%. يمكن إزالة السكريات المتعددة عن طريق الترسيب باستخدام كلوريد الليثيوم (2). يمكن إزالة البروتينات الملوثة، مثل البروتيازات، عن طريق استخلاص الفينول/الكلوروفورم واستخلاص الإيثانول (2). قد يحتوي بعض الحمض النووي الريبوزي المستهدف على فترات توقف طويلة لإنزيم النسخ العكسي؛ لذا يُنصح باستخدام التمهيد العشوائي بدلاً من d(T)23VN. استخدم كمية كافية من الحمض النووي الريبوزي.