وحدة تخليق الشريط الأول من الحمض النووي الريبي (RNA) من شركة نيو إنجلاند بيولابس، E7771L، NEBNext® Ultra™ II

الفئات ذات الصلة: أتمتة تحضير مكتبة NEBNext® NGS، تحضير مكتبة الحمض النووي الريبوزي (RNA) لتقنية Illumina، مواصفات تحضير مكتبة تسلسل الجيل التالي. المواد المطلوبة (غير المرفقة ): وحدة العزل المغناطيسي للحمض النووي الريبوزي الرسول متعدد الأدينين (NEB #E7490) أو مجموعة استنزاف الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (rRNA) الإصدار 2 (بشري/فأري/جرذي) (NEB #E7400 أو NEB #E7405) أو مجموعة استنزاف الغلوبين والحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (بشري/فأري/جرذي) (NEB #E7750 أو NEB #E7755) أو مجموعة استنزاف الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (بكتيريا) (NEB #E7850 أو NEB #E7860) أو مجموعة الكواشف الأساسية لاستنزاف الحمض النووي الريبوزي (NEB #E7865 أو NEB #E7870) أو مجموعة استنزاف الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (rRNA) من NEBNext (إنسان/فأر/جرذ) (NEB #E6310 أو NEB #E6350) وحدة NEBNext Ultra II لتخليق السلسلة الثانية من الحمض النووي الريبي الموجه (NEB #E7550) أو وحدة NEBNext Ultra II لتخليق السلسلة الثانية من الحمض النووي الريبي غير الموجه (NEB #E6111) حامل أو صفيحة مغناطيسية (مثل حامل الفصل المغناطيسي NEBNext® (NEB #S1515S)، أو صفيحة Alpaqua® 96S المغناطيسية الفائقة (#A001322)، أو ما يعادلها) الأسئلة الشائعة : س: ما هي المواد الأخرى التي أحتاجها بالإضافة إلى وحدة NEBNext Ultra II لتخليق السلسلة الأولى لتجارب تسلسل الحمض النووي الريبي؟ ج: إذا كنت تبدأ من الحمض النووي الريبوزي الكلي، فنوصي باستخدام إما وحدة العزل المغناطيسي للحمض النووي الريبوزي الرسول متعدد الأدينين من NEBNext (NEB #E7490) أو مجموعة استنفاد الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي v2 من NEBNext (بشري/فأري/جرذي) (NEB #E7400 أو NEB #7405) أو مجموعة استنفاد الغلوبين والحمض النووي الريبوزي الريبوسومي من NEBNext (بشري/فأري/جرذي) (NEB #E7750 أو NEB #E7755) أو مجموعة استنفاد الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي من NEBNext (بكتيريا) (NEB #E7850 أو NEB #E7860) أو مجموعة الكواشف الأساسية لاستنفاد الحمض النووي الريبوزي من NEBNext (NEB #E7865 أو NEB #E7870) أو مجموعة استنفاد الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي من NEBNext (بشري/فأري/جرذي) (NEB #E6310 أو NEB #E6350) قبل أول تركيب السلاسل. لإجراءات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) الموجهة، استخدم المجموعات التالية: وحدة NEBNext Ultra II لتخليق السلسلة الثانية من الحمض النووي الريبوزي (NEB #E7550)، ووحدة NEBNext Ultra II لإصلاح النهايات/إضافة ذيل dA (NEB #E7546)، ووحدة NEBNext Ultra II للربط (NEB #E7595)، ومزيج NEBNext Ultra II Q5 الرئيسي (NEB #M0544). أما لإجراءات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) غير الموجهة، فاستخدم المجموعات التالية: وحدة NEBNext Ultra II لتخليق السلسلة الثانية من الحمض النووي الريبوزي غير الموجهة (NEB #E6111)، ووحدة NEBNext Ultra II لإصلاح النهايات/إضافة ذيل dA (NEB #E7546)، ووحدة NEBNext Ultra II للربط (NEB #E7595)، ومزيج NEBNext Ultra II Q5 الرئيسي (NEB #M0544). بالنسبة للمحولات والبادئات، فإن NEBNext Oligos متوافقة، وكذلك المحولات والبادئات من مصادر أخرى. س: ماذا لو قمتُ بتجزئة الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) وأحتاج إلى إجراء تفاعل تخليق السلسلة الأولى؟ ج: إذا كنتَ تبدأ من حمض نووي ريبوزي كلي مُجزأ، فنوصي باستخدام مجموعة NEBNext rRNA Depletion Kit (بشري/فأر/جرذ؛ #E6310) قبل تخليق السلسلة الأولى. اتبع البروتوكول الوارد في الفصل 3 من مجموعة Ultra II Directional RNA Library Prep Kit (#E7760) لسير عمل تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) الخاص بالسلسلة. أما بالنسبة لسير عمل تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) غير الموجه، فاتبع البروتوكول الوارد في الفصل 3 من مجموعة Ultra II RNA Library Prep Kit (#E7770). س: ماذا لو قمتُ بتجزئة الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) وأحتاج فقط إلى إجراء تفاعل تخليق السلسلة الأولى؟ ج: إذا كنت تبدأ من mRNA مجزأ، فننصح باتباع البروتوكول الوارد في الفصل 5 من مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي الريبوزي الاتجاهية Ultra II (#E7760) لسير عمل تسلسل الحمض النووي الريبوزي الخاص بالسلسلة. أما بالنسبة لسير عمل تسلسل الحمض النووي الريبوزي غير الاتجاهي، فاتبع البروتوكول الوارد في الفصل 5 من مجموعة تحضير مكتبة الحمض النووي الريبوزي Ultra II (#E7770). س: ما هو تركيب البادئات العشوائية؟ ج: البادئات العشوائية عبارة عن سداسيات عشوائية متوفرة بتركيز 1.9 ملي مولار.