نيو إنجلاند بيولابس، E7780S، NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (مجموعة البادئات ذات الفهرس المزدوج 2)

توفر أوليغومرات NEBNext Multiplex محولات وبادئات لتمكين إنتاج مكتبات Illumina متعددة عالية الإنتاجية. يقلل تصميم حلقة الدبوس الفريدة لمحولات NEBNext من تكوين ثنائيات المحولات، وتتيح بادئات NEBNext index PCR دمج الفهرسة أثناء تضخيم المكتبة. تتضمن هذه المجموعة 8 بادئات فهرسة i5 و12 بادئة فهرسة i7 للفهرسة المزدوجة. الفئات ذات الصلة : أوليغومرات NEBNext® Multiplex (محولات وبادئات) الأسئلة الشائعة: س: أين يمكنني العثور على أوراق العينات لهذه الأوليغومرات المتعددة؟ ج: يمكن تنزيل أوراق العينات الخاصة بالجهاز من قسم إرشادات الاستخدام الموجود ضمن علامة التبويب "البروتوكولات، الدليل، والاستخدام". إذا كنت تستخدم جهاز NovaSeq® 6000 مع مجموعات الكواشف v1.0، أو MiniSeq® مع مجموعات الكواشف السريعة، أو MiSeq®، أو HiSeq® 2000/2500 (خلية تدفق ثنائية الأطراف)، أو HiSeq 3000/4000 (خلية تدفق أحادية القراءة)، فيُرجى اختيار ورقة العينات المُعنونة "ورقة عينات سير عمل السلسلة الأمامية". * إذا كنت تستخدم جهاز iSeq 100، أو MiniSeq® مع مجموعات الكواشف القياسية، أو أنظمة NextSeq®، أو NovaSeq 6000 مع مجموعات الكواشف v1.5، أو HiSeq 2000/2500 (خلية تدفق أحادية القراءة)، أو HiSeq 3000/4000 (خلية تدفق ثنائية الأطراف)، فيُرجى اختيار ورقة العينات المُعنونة "ورقة عينات سير عمل السلسلة الأمامية". * * تستند أوراق العينات لدينا إلى دليل نظرة عامة على تسلسل Illumina الحالي. يرجى اختيار ورقة العينة المناسبة بناءً على جهاز Illumina الخاص بك ومجموعات الكواشف. لمزيد من المعلومات حول فهرسة Illumina، يُرجى الرجوع إلى أحدث إصدار من دليل نظرة عامة على تسلسل Illumina. س: هل تأتي مجموعة NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (مجموعة بادئات الفهرسة المزدوجة 2) مزودة بكواشف تحضير المكتبة؟ ج: لا. تتضمن مجموعة NEBNext Multiplex Oligos for Illumina (مجموعة بادئات الفهرسة المزدوجة 2) محولات، وبادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وإنزيم USER® فقط. تُباع مجموعات تحضير مكتبة NEBNext بشكل منفصل. س: هل يمكنني استخدام مجموعة NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (مجموعة بادئات الفهرسة المزدوجة 2) لتحضير المكتبة من عينات الحمض النووي DNA وRNA؟ ج: نعم. تتوافق مجموعة NEBNext Multiplex Oligos for Illumina (مجموعة بادئات الفهرسة المزدوجة 2) مع تحضير مكتبات الحمض النووي DNA وRNA. يُرجى الرجوع إلى الفصول المناسبة في الدليل للاطلاع على بروتوكولات تحضير مكتبات الحمض النووي DNA أو ChIP أو RNA. س: كم عدد المكتبات التي يُمكنني تحضيرها باستخدام مجموعة NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (مجموعة البادئات ذات الفهرسة المزدوجة 2)؟ ج: يُمكن تحضير ما يصل إلى 96 مكتبة باستخدام كل مجموعة من مجموعات NEBNext Multiplex Oligos for Illumina (مجموعة البادئات ذات الفهرسة المزدوجة 2). س: عند تجميع أقل من 96 عينة، ما هي مجموعة الفهارس التي يجب استخدامها؟ ج: يُرجى الرجوع إلى الملحق أ في الفصل 10 من الدليل (الصفحة 115) للاطلاع على إرشادات مفصلة حول الفهرسة منخفضة المستوى. س: هل أحتاج إلى إضافة بادئات تسلسل مخصصة عند تحضير مكتبات التسلسل باستخدام مجموعة NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (مجموعة البادئات ذات الفهرسة المزدوجة 2) على أجهزة تسلسل Illumina؟ ج: لا. المكتبات المُحضّرة باستخدام مجموعة NEBNext Multiplex Oligos for Illumina (مجموعة البادئات ذات الفهرسة المزدوجة 2) متوافقة تمامًا مع بروتوكولات تسلسل Illumina لمكتبات TruSeq® HT. بالنسبة لأنظمة HiSeq® أو HiScan®SQ أو GAIIx® على خلايا التدفق أحادية القراءة، يلزم طلب صندوق TruSeq Dual Index Sequencing Primer Box، أحادي القراءة (صندوق للاستخدام لمرة واحدة) (رقم كتالوج Illumina: FC-121-1003) بشكل منفصل عند استخدام كلا المؤشرين. هذا الصندوق الإضافي غير مطلوب مع نظام MiSeq® أو على خلايا التدفق ثنائية النهاية لأنظمة HiSeq وHiScanSQ وGAIIx. يُرجى مراجعة موقع Illumina الإلكتروني للاطلاع على المعلومات الكاملة. س: هل يُمكنني إجراء عمليات قراءة أحادية والحصول على تسلسلات المؤشرين؟ هل يُمكنني تشغيل كلٍ من وصفات القراءة الأحادية والثنائية النهاية باستخدام مكتبات ذات مؤشرين؟ ج: نعم. يُرجى تحديد سير العمل المناسب بناءً على نوع خلية التدفق (قراءة أحادية أو ثنائية النهاية) عند بدء التشغيل لضمان استخدام الكيمياء الصحيحة. في حال استخدام خلية تدفق أحادية القراءة، يلزم استخدام صندوق بادئات التسلسل TruSeq Dual Index Sequencing Primer Box، أحادي القراءة (صندوق للاستخدام لمرة واحدة) (رقم الكتالوج FC-121-1003) لتسلسل كلا قراءتي الفهرس. مقتبس من موقع Illumina الإلكتروني. س: هل تركيز إنزيم USER® في مجموعات NEBNext Oligos مطابق لتركيزه في المنتج المستقل؟ ج: نعم، تركيز USER في مجموعات NEBNext Oligo هو 1000 وحدة/مل، وهو يُباع أيضًا بشكل منفصل تحت رقم NEB M5505. س: كيف أستخدم ورقة العينات المرفقة من NEB لجهازي المحدد؟ ج: عند استخدام LRM، استخدم ملف .tsv المرفق في قسم "إرشادات الاستخدام" في صفحة المنتج. في حال عدم استخدام LRM: نزّل ورقة العينات من صفحة المنتج لمجموعة الفهرس التي تستخدمها من موقع NEB.com الإلكتروني. يمكنك العثور على نماذج الأوراق في قسم البروتوكولات والأدلة والاستخدام/إرشادات الاستخدام أو في قسم الأسئلة الشائعة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها/هل لديك نموذج ورقة؟ بالنسبة للمكتبات ذات الفهرسة المزدوجة، تأكد من تنزيل الإصدار الصحيح من نموذج الورقة وفقًا للمقال رقم 1800 في قاعدة معارف Illumina على الرابط التالي: https://knowledge.illumina.com/software/general/software-general-reference_material-list/000001800. استخدم برنامج Illumina Experiment Manager لإنشاء نموذج ورقة خاص بجهازك وإعدادات تشغيل التسلسل. أنشئ نموذج ورقة بصف واحد وافتحه في برنامج Excel. انسخ تسلسلات الفهرسة من نموذج ورقة NEB والصقه في ملف Excel هذا. تأكد من محاذاة الأعمدة مع عناوينها. يُرجى التواصل مع الدعم الفني لشركة Illumina لأي استفسارات إضافية حول استخدام برنامج IEM أو تنسيق نموذج الورقة. سؤال: هل المكتبات ذات الفهرسة المزدوجة متوافقة مع التسلسل أحادي الطرف؟ ج: نعم، تتوافق سلاسل NEBNext Oligos الخاصة بـ Illumina، بما في ذلك سلاسل الفهرسة المزدوجة، مع تسلسل القراءة المفردة. يُرجى الرجوع إلى دليل نظرة عامة على التسلسل المفهرس من Illumina (الإصدار الحالي) للاطلاع على تفاصيل سير عمل التسلسل المفهرس المزدوج على خلية تدفق القراءة المفردة أو خلية تدفق القراءة المزدوجة. س: ما هي التسلسلات التي يجب تقليمها لمكتبات NEBNext التي يتم تسلسلها على جهاز Illumina؟ ج: تشبه مكتبات NEBNext الخاصة بـ Illumina مكتبات TruSeq ويمكن تقليمها مثل TruSeq: قراءة المحول 1 AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCA قراءة المحول 2 AGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGT