مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0206L، إكسونوكلياز III (الإشريكية القولونية)

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونوكليازات غير المحددة. التطبيقات: البوليميرازات لمعالجة الحمض النووي. المواصفات: تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لإنتاج 1 نانومول من النيوكليوتيد الكلي القابل للذوبان في الأحماض في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في 1X NEBuffer 1 مع 0.15 ملي مول من الحمض النووي المزدوج [3H] المُعالج بالموجات فوق الصوتية. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 1 بتركيز 1X، يحتوي على: 10 ملي مولار من ثنائي-تريس-بروبان-هيدروكلوريد، 10 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، 1 ملي مولار من ثنائي ثيوثريتول (الأس الهيدروجيني 7 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 5 ملي مولار من فوسفات البوتاسيوم، 200 ملي مولار من كلوريد البوتاسيوم، 5 ملي مولار من بيتا-ميركابتوإيثانول، 0.05 ملي مولار من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، 200 ميكروغرام/مل من ألبومين المصل البقري، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 6.5 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري: 70 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. النشاط النوعي: 150,000 وحدة/ملغ. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إنزيم إكسونوكلياز III M0206 في محاليل NEB المختلفة؟ ج: يُبين الجدول أدناه نشاط إنزيم إكسونوكلياز III في محاليل منظمة مختلفة: NEBuffer 1 - 100%، NEBuffer 2 - 75%، NEBuffer 3 - 25%، NEBuffer 4 - 75%، CutSmart - 100%. س: ما الفرق بين إنزيم إكسونوكلياز T5 وإنزيم إكسونوكلياز III (NEB# M0206)؟ ج: يعمل إنزيم إكسونوكلياز III في الاتجاه من 3' إلى 5'، عكس اتجاه عمل إنزيم إكسونوكلياز T5 الذي يعمل في الاتجاه من 5' إلى 3'. س: ما الفرق بين إنزيم إكسونوكلياز T7 وإنزيم إكسونوكلياز III (NEB# M0206)؟ ج: يعمل إنزيم إكسونوكلياز III في الاتجاه من 3' إلى 5'، عكس اتجاه عمل إنزيم إكسونوكلياز T7 وإنزيم لامدا إكسونوكلياز. س: هل يعمل إنزيم إكسونوكلياز III في محلول rCutSmart المنظم؟ ج: نعم، يعمل إنزيم إكسونوكلياز III في محلول rCutSmart المنظم. للاطلاع على نسبة نشاطه الوظيفي في rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®. س: هل يمكن استخدام إكسونوكلياز I مع إكسونوكلياز ثنائي السلاسل لتنظيف مستحضرات البلازميد؟ ج: يمكن استخدام إكسونوكلياز I مع إكسونوكلياز لامدا (NEB# M0262) لتنظيف مستحضرات البلازميد. كما يمكن استخدام إكسونوكلياز III (NEB# M0206) وإكسونوكلياز T7 (NEB# M0263)، ولكنهما قد يُتلفان البلازميدات المقطوعة. على الرغم من إمكانية استخدام Exonuclease I، إلا أننا نوصي باستخدام Exonuclease V (RecBCD) (NEB #M0345) لإزالة الحمض النووي الصبغي بعد تحضير البلازميد (انظر ملاحظة التطبيق الخاصة بنا: استخدام Exonuclease V (RecBCD) للتخلص من الحمض النووي الجينومي المتبقي عند تنقية البلازميدات منخفضة النسخ باستخدام مجموعة Monarch® Plasmid Miniprep Kit).