نيو إنجلاند بيولابس، M0239L، T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase)

يقوم إنزيم T4 RNA Ligase 2 بربط الشقوق في الحمض النووي الريبوزي المزدوج (dsRNA)، ويمكن استخدامه أيضًا لربط مجموعة الهيدروكسيل 3' في الحمض النووي الريبوزي (RNA) بمجموعة الفوسفات 5' في الحمض النووي (DNA) في بنية مزدوجة السلاسل. التصنيفات ذات الصلة : مواصفات ربط الحمض النووي الريبوزي . تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لربط 0.4 ميكروغرام من مزيج متساوي المولات من الحمض النووي الريبوزي (RNA) المكون من 23 نيوكليوتيدًا و17 نيوكليوتيدًا في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولترًا خلال 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل T4 Rnl2 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول تفاعل T4 Rnl2 بتركيز 1X: 50 ملي مولار Tris-HCl، 2 ملي مولار MgCl2، 1 ملي مولار DTT، 400 ميكرومولار ATP (الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار KCl، 35 ملي مولار (NH4)2SO4، 0.1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري: 80 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. النشاط النوعي: 40,000 وحدة/ملغ. شروط فحص الوحدة : محلول تفاعل T4 Rnl2 بتركيز 1X و0.4 ميكروغرام من مزيج متساوي المولات من الحمض النووي الريبي 23-mer و17-mer. بعد التحضين عند درجة حرارة 37 مئوية لمدة 30 دقيقة، يُكشف عن الناتج المربوط على هلام بولي أكريلاميد بنسبة 15%. الأسئلة الشائعة: س: كيف يمكنني تحقيق الربط الأمثل لجزيء أوليغوميري من الحمض النووي أحادي السلسلة المُفسفر عند الطرف 5' مع الطرف 3' لركيزة الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة باستخدام قالب من الحمض النووي أحادي السلسلة أو الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة باستخدام إنزيم T4 RNA Ligase 2؟ ج: تم تحسين محلول التفاعل المرفق مع هذا الإنزيم لربط الشقوق في الحمض النووي الريبي ثنائي السلسلة. لتحسين ربط الشقوق في هجائن الحمض النووي/الحمض النووي الريبي، نوصي بزيادة تركيز المغنيسيوم من 2 ملي مولار إلى 10 ملي مولار في التفاعل. إضافة 10-15% من بولي إيثيلين جلايكول 8000 إلى التفاعل النهائي ستعزز كفاءة الربط. المحلول الحالي مناسب لربط الشقوق في الحمض النووي الريبي ثنائي السلسلة، ولكنه غير مناسب لربط الشقوق في هجائن الحمض النووي/الحمض النووي الريبي. س: ما مدى تحمل هذا الإنزيم للملح؟ أ: NEB # RNA Ligase Salt Tolevance M0204 T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase) ≤ 50 mM M0239 T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase) ≤ 50 mM M0242 T4 RNA Ligase 2, truncated ≤ 100 mM M0351 T4 RNA Ligase 2, trunc. K277Q ≤ 100 mM M0373 T4 RNA Ligase 2, trunc. KQ ≤ 100 mM M0375 SplintR Ligase ≤ 50 mM E2610 5' Adenylation Kit (Mth Ligase) ≤ 300 mM M0319 Thermostable 5' App DNA/RNA Ligase ≤ 50 mM