مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0240L، Fpg

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية الخاصة بالبنية. التطبيقات: بوليميرازات لمعالجة الحمض النووي. المواصفات: تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لقطع 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة يحتوي على قاعدة 8-أوكسوجوانين واحدة مقترنة بسيتوزين في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 1 بتركيز 1X، مُضاف إليه 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المُعاد تركيبه، بدرجة نقاء بيولوجية جزيئية. يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 1 بتركيز 1X، 10 ملي مولار من ثنائي-تريس-بروبان-هيدروكلوريد، 10 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، 1 ملي مولار من ثنائي ثيوثريتول (الأس الهيدروجيني 7 عند 25 درجة مئوية). التخفيف المُوصى به لاختبار المذنب: من 1:10 إلى 1:10 (4، 5، 6). للاطلاع على البروتوكول، يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني: http://cometassay.com. محلول التخزين: 20 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار NaCl، 0.5 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل BSA، 50% جلسرين، درجة الحموضة 8 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 60 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط Fpg في محاليل NEBuffers من 1 إلى 4؟ ج: يتمتع Fpg بنشاط 100% في محاليل NEBuffers 1 و2 و4. ويتمتع بنشاط 75% في محلول NEBuffer 3. س: هل يقوم Fpg بفصل هيدروكسي ميثيل يوراسيل؟ ج: لا، لا يقوم Fpg بفصل هيدروكسي ميثيل يوراسيل. س: هل يقطع Fpg أحد الشريطين فقط، أم أنه يُسبب كسرًا في الشريطين؟ ج: يقطع Fpg الشريط الذي يحتوي على التلف. إذا كان هناك تلف في كلا الشريطين، فإنه سيقطعهما معًا. س: ما هو الوزن الجزيئي لـ Fpg؟ ج: الوزن الجزيئي لإنزيم Fpg هو 30 كيلو دالتون. س: ما الفرق بين استخدام إنزيم Fpg وإنزيم hOOG1؟ ج: يقوم إنزيم hOOG1 بقطع الرابطة في الطرف 3' للقاعدة المعدلة، مما يُحدث شقًا ويترك القاعدة المعدلة في ركيزة الحمض النووي. يتمتع إنزيم Fpg بنفس التخصص الأساسي للركيزة، ولكنه يقطع في الطرفين 5' و3' للقاعدة المعدلة. تنفصل القاعدة المعدلة ويبقى الحمض النووي مع وجود فجوة مكانها. س: هل يحتوي إنزيم Fpg على علامة؟ ج: بروتين Fpg الذي تبيعه شركة NEB لا يحتوي على علامة. س: ما هو المحلول المنظم المناسب لكل من إنزيم Endonuclease III وإنزيم Fpg؟ ج: أي محلول منظم من NEBuffer 1-4 مناسب لكلا الإنزيمين. س: ما هي الركيزة التي يُختبر عليها إنزيم Fpg؟ ج: الركيزة المستخدمة لاختبار إنزيم Fpg موصوفة في تعريف الوحدة. وهي عبارة عن جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على قاعدة 8-أوكسوجوانين واحدة مقترنة بقاعدة سيتوزين. س: ما هو نشاط إنزيم Fpg في محلول rCutSmart؟ ج: نشاط إنزيم Fpg في محلول rCutSmart هو 100%. يُرجى مراجعة قسم "نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart™" للاطلاع على نشاط الإنزيمات الأخرى في محلول rCutSmart.