نيو إنجلاند بيولابس، M0242L، T4 RNA Ligase 2، مبتور

الفئات ذات الصلة تطبيقات ربط الحمض النووي الريبي مواصفات استنساخ الحمض النووي الريبي تعريف الوحدة 200 وحدة تُعرف بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لإعطاء 80٪ من ربط الحمض النووي الريبي المكون من 31 قاعدة بالنهاية المؤدينة مسبقًا لـ DNA المكون من 17 قاعدة رابط استنساخ الحمض النووي الريبي الميكروي العالمي (#S1315) في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولتر في ساعة واحدة عند 25 درجة مئوية. 5´-FAM-rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´ 5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´ التركيز المولي = 14 ميكرومولار شروط التفاعل : محلول تفاعل T4 RNA Ligase بتركيز 1X، يُحضن عند 25 درجة مئوية. محلول تفاعل T4 RNA Ligase بتركيز 1X: 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار MgCl2، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. شروط فحص الوحدة محلول تفاعل ربط الحمض النووي الريبوزي T4 بتركيز 1X مُضاف إليه 10% (وزن/حجم) من بولي إيثيلين جلايكول بوزن جزيئي 8000، و20 بيكومول من الحمض النووي الريبوزي المُوسَم بـ 5´-FAM، و40 بيكومول من رابط الحمض النووي المُسبق الأدينيل. بعد التحضين عند 25 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة، يُكشف عن ناتج الربط على هلام بولي أكريلاميد مُشوه بنسبة 15%. الأسئلة الشائعة : س: كيف يُمكنني زيادة كفاءة الربط؟ ج: بشكل عام، زيادة وقت التفاعل، وخفض درجة حرارة التفاعل، وزيادة كثافة الجزيئات، كلها عوامل تُؤدي إلى تفاعلات ربط أكثر اكتمالًا. يُمكن زيادة أوقات التفاعل إلى 24 ساعة أو أكثر. بالنسبة لعمليات الربط التي تستغرق أكثر من ساعتين، نقوم عادةً بالتحضين عند درجة حرارة أقل من 16 درجة مئوية. يُشير بعض العلماء إلى إمكانية الربط على الجليد (0 درجة مئوية) لمدة 24 ساعة. نوصي باستخدام بولي إيثيلين جلايكول بتركيز يصل إلى 15% (وزن/حجم) من بولي إيثيلين جلايكول 4000 أو 8000. لم يؤدِ رفع تركيزات PEG إلى زيادة كفاءة الربط. س: هل PEG 8000 متوفر للشراء؟ ج: PEG 8000 مُدرج كمكون في محلول تفاعل إنزيم ربط الحمض النووي الريبي T4 (NEB #B0216). س: ما مدى تحمل هذا الإنزيم للملح؟ ج: NEB # RNA Ligase Salt Tolerance M0204 T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase) ≤ 50 mM M0239 T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase) ≤ 50 mM M0242 T4 RNA Ligase 2, truncated ≤ 100 mM M0351 T4 RNA Ligase 2, trunc. K277Q ≤ 100 mM M0373 T4 RNA Ligase 2, trunc. KQ ≤ 100 ملي مولار، M0375 SplintR Ligase ≤ 50 ملي مولار، E2610 5' Adenylation Kit (Mth Ligase) ≤ 300 ملي مولار، M0319 Thermostable 5' App DNA/RNA Ligase ≤ 50 ملي مولار